缺氧诱导因子1α在缺氧诱导喉鳞癌细胞化疗耐药中的调控作用及分子机制

摘要

本文从以下三个部分来展开论述：
　　第一章
　　 目的：探讨喉鳞癌组织中缺氧诱导因子lα(hypoxia-inducible factor lα，HIF-1α)与P糖蛋白、Survivin表达间的相关性；三者与临床病理特征、预后的关系。
　　 方法：免疫组化法测HIF-1α、P糖蛋白、Survivin在86例喉鳞癌，32例正常喉粘膜上皮中的表达。
　　 结果：喉鳞癌组织中HIF-1α、P糖蛋白、Survivin阳性表达率均高于正常对照组，与肿瘤的临床分期、淋巴结转移、术后生存率相关。HIF-1α与P糖蛋白、Survivin表达间均呈正相关。生存分析示淋巴结转移、Survivin阳性表达率可作为喉鳞癌的独立预后因素。
　　 结论：喉鳞痛组织中HIF-1α可能对P糖蛋白、Survivin表达存在正向调控性。三者均可作为评估喉鳞癌病程进展及预后的生物学指标。
　　 第二章
　　 目的：探讨缺氧微环境对喉鳞癌细胞化疗耐药性的影响及其调控机制。
　　 方法：喉鳞癌细胞于常氧或缺氧下培养，MTT法测细胞药物敏感性：Annexin v/PI法测紫杉醇所诱导的细胞凋亡率；阿霉素蓄积与滞留试验测细胞的药物蓄积率、潴留率；实时荧光定量PCR(Realtime Quantative RT-PCR，QRT-PCR)、Western blot测MDR1、Survivin基因的mRNA、蛋白表达。
　　 结果：与常氧组相比，缺氧喉鳞癌细胞的药物敏感性、细胞凋亡率、药物蓄积率及潴留率均显著降低；细胞中MDRI、Survivin基因的mRNA、蛋白表达水平随缺氧时间的延长而升高，并于缺氧24小时达到高峰。
　　 结论：缺氧微环境可能通过上调MDR1、Survivin基因表达而增强喉鳞癌细胞的药物外排及凋亡抑制能力，从而上调细胞的化疗耐药性。
　　 第三章
　　 目的：探讨HIF-1α在缺氧诱导喉鳞癌细胞化疗耐药中的调控作用及机制。
　　 方法：QRT-PCR、Western blot测常氧或缺氧下喉鳞癌细胞中HIF-1αmRNA、蛋白表达。小干扰RNA抑制缺氧下喉鳞癌细胞中HIF-1α基因表达后，QRT-PCR及Westernblot测HIF-1α、MDR1、Survivin基因的表达；联合MTT法、Annexin V/PI法、阿霉素蓄积与潴留试验测细胞化疗耐药性的变化。
　　 结果：HIF-1αmRNA表达不随细胞缺氧而改变，而HIF-1α蛋白表达随缺氧时间延长而上调，并于缺氧24小时达到高峰。HF-1α基因表达沉默后，缺氧喉鳞癌细胞中MDR1、Survivin基因表达随之下调；细胞的药物敏感性增强；紫杉醇诱导的细胞凋亡率升高；细胞的药物蓄积率、潴留率显著上调。
　　 结论：缺氧微环境可能通过HIF-1α上调MDR1、Survivin基因表达而增强喉鳞癌细胞的化疗耐药性。