男性生殖道细菌群落组成与生殖健康的关系

摘要

由于检测方法的局限,对于定植于男性生殖道中的细菌群落组成情况及其与生殖健康之间的关系一直存在争论。在本研究中,我们利用分子微生态学检测技术,分别对于正常和患病男性精液以及前列腺液中的细菌群落组成进行研究,并通过比较不同健康状态下男性生殖道中的细菌群落组成差异,揭示男性生殖道细菌群落组成与男性生殖健康之间的关系。
　　在研究的第一部分,我们将19例正常男性和58例不育症患者作为研究对象,以揭示正常和不育男性生殖道中细菌群落组成情况,并进一步研究精液中细菌群落组成与男性不育之间的关系。
　　首先,对一部分随机选取的精液样本进行革兰染色,结果显示男性精液中普遍存在细菌,且细菌的类型较多,细菌的数量也多于精子的数量。然后,对于每个样本进行基因组DNA抽提,利用针对原核细胞16S rRNA基因V1、V2片段的通用引物对每个样本进行PCR扩增,并对扩增产物进行焦磷酸测序,通过序列比对来研究样本中细菌群落组成结构。通过对每个样本中细菌群落组成进行基于假F的统计学分析,发现精液中细菌群落组成可以归为六种类型。利用卡方检验和Fisher氏精确性检测,发现六种细菌群落组成类型与精液参数之间没有相关性(p＞0.15)。利用比例优势模型对于数据进行分析,发现在所有检测到的优势细菌中,普氏厌氧球菌与精子质量存在负相关(p=0.0012)。通过本研究,我们发现存在于精液中的细菌类型与其他作者报道的存在于女性细菌性阴道病患者的生殖道中的类型相似,提示男女性生殖道可能具有一些共有的细菌类型,在某些条件下这些细菌可能会导致不育或生殖道疾病。
　　在研究的第二部分,为了探讨慢性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征(CP/CPPS)和不育症患者前列腺液细菌群落组成情况,我们将11例不育男性患者和51例CP/CPPS患者的前列腺液作为研究对象,CP/CPPS患者分为炎症性CP/CPPS和非炎症性CP/CPPS两组类型,26例正常男性的前列腺液作为对照组。
　　首先,对样本进行全基因组DNA抽提,并利用通用引物以基因组DNA为模板进行PCR扩增,得到16S rRNA的V3区基因片段。结果显示,患者组前列腺液16S rRNA基因的阳性率高于正常男性(p＜0.01),不同患者组之间前列腺液16S rRNA基因阳性率没有统计学意义(p＞0.05)。对于三种不同类型患者前列腺液中的16S rRNA基因进行变性梯度凝胶电泳,并对电泳结果进行主成分分析(PCA)和偏最小二乘判别分析(PLS-DA),发现不同患者组中的细菌群落组成各不相同。有三个条带在区分不同疾病组细菌群落组成中起到了重要的作用(p＜0.05)。其中条带1和条带4所代表的细菌类型在区分炎症性与非炎症性CP/CPPS两种类型的前列腺炎疾病中起着重要的作用(p＜0.05)。此外,研究发现条带1和条带4两个条带所代表的细菌类型难以利用传统的培养方法进行检测,但是能够通过基因测序的方式进行鉴定。我们的研究结果表明,分子微生态检测技术是鉴定男性生殖道细菌群落的有效方法,而且提示前列腺和下尿道的微生态平衡可能在维持男性生殖道健康中起着重要的作用。