孤儿核受体Nur77在低剪切应力诱导的小鼠颈动脉血管重构中的作用及机制

摘要

目的：
　　探讨在低剪切应力诱导小鼠颈动脉血管重构过程中，孤儿核受体Nur77的表达变化及其对血管重构的影响和作用机制。
　　方法：
　　1）6-8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组和血管重构模型组，部分结扎左侧颈总动脉分支方法构建低剪切应力诱导血管重构模型。术后4周取材，苏木素-伊红（HE）染色分析颈总动脉内中膜面积及厚度，Verhoeff-Van Gieson弹性纤维染色标记血管弹力板，天狼猩红染色标记胶原，免疫荧光染色标记Nur77，DHE探针检测血管局部ROS水平。
　　2）原代培养大鼠血管平滑肌细胞，给予ox-LDL、7-KC、9-HODE、13-HODE、H2O2及其抑制剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）刺激，western blotting和real time PCR方法检测Nur77表达。
　　3）6-8周雄性Nur77-/-小鼠和C57BL/6小鼠造膜4周后取材，如方法1）检测血管重构相关指标，同时免疫荧光染色方法检测MMP9和PCNA表达，原位末端标记（TUNEL）法检测血管细胞凋亡水平。
　　结果：
　　1）模型组小鼠左颈动脉内中膜面积及厚度较假手术组显著增加（p＜0.05），弹力板多处断裂，排列紊乱，局部ROS水平升高（p＜0.05）伴Nur77蛋白表达显著增加（p＜0.05），上调的Nur77蛋白主要分布在血管平滑肌细胞（VSMC）中；
　　2）体外给予ox-LDL、7-KC、9-HODE、13-HODE、H2O2等氧化应激刺激后，大鼠VSMCNur77的mRNA及蛋白水平显著增高，H2O2抑制剂NAC能够逆转上述效应；
　　3）造模4w后，Nur77-/-小鼠组左颈动脉内中膜面积及厚度较显著高于C57BL/6小鼠组（p＜0.05），弹力板断裂增多，排列紊乱，局部MMP9、PCNA高表达（p＜0.05），但两组血管细胞凋亡水平无差别（p>0.05）。
　　结论：
　　孤儿核受体Nur77在低剪切力诱导小鼠颈动脉血管重构过程中表达上调，上调的Nur77蛋白主要分布在VSMC中，可能为氧化应激刺激诱导产生；增加的Nur77蛋白可能通过抑制血管平滑肌增殖，上调MMP9活性，抑制低剪切力诱导的动脉血管重构。

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英文缩略词表

绪论

第一部分Nur77在低剪切应力诱导小鼠颈动脉血管重构中的表达变化及机制

前言

材料和方法

结果

讨论

第二部分Nur77对低剪切应力诱导小鼠颈动脉血管重构中的影响及作用机制

前言

材料和方法

结果

讨论

总结

参考文献

综述: 小鼠动脉粥样硬化易损斑块模型进展

致谢

攻读硕士学位期间发表文章