应用脂肪干细胞构建组织工程脂肪组织的实验研究

摘要

目的：
　　1、初步探讨可注射聚谷氨酸苄酯微球（PBLG）体外生物学特性及体内组织相容性；
　　2、利用可注射PBLG多孔微球，构建皮下组织工程化脂肪组织；3、利用聚谷氨酸(PLGA)/壳聚糖（CS）支架构建硬膜外脂肪组织，预防椎板切除术后硬膜外瘢痕的增生。
　　方法：
　　1、将分离的人成纤维细胞（hFBs）其接种在PBLG微球上，于体外观察PBLG对接种于的hFBs的细胞增殖及胶原合成相关基因的影响；通过组织学染色，观察体内微球注射后的组织相容性；
　　2、将分离的人脂肪干细胞（hASCs）接种在PBLG微球上构建细胞/材料复合物，体外观察hASCs在PBLG微球上的成脂情况，然后将构建好的成脂诱导的细胞/材料复合物注射到裸鼠体内，于第4周和第8周分别取材，通过组织形态学观察（H&E，Masson，油红O染色及SEM检查）及生物化学分析（Real-time PCR，GPDH活性及羟脯氨酸定量），来检测新生物是否具有正常脂肪组织的形态及功能特点；
　　3、将分离的新西兰大白兔脂肪干细胞（ rASCs）接种在PLGA/CS支架上构建细胞/支架复合物，回植到新西兰大白兔硬膜外脂肪缺损区，于术后第1、12、24周MRI检查动态观察组织的修复情况，并于第24周取材，行组织学染色，评估组织的修复情况。
　　结果：
　　1、PBLG微球的生物相容性好，能抑制hFBs的I和III型前胶原基因的表达，同时能促进IL-8基因的表达，但对TGFβ1基因的调控作用不明显；
　　2、利用可注射PBLG微球构建的新生组织，在形态学上，与正常脂肪组织类似，都是由带有血液供应的小叶样微组织构成；在生物化学上，成脂分化的相关指标的表达都明显增强；
　　3、利用PLGA/CS支架构建的硬膜外新生组织，具有脂肪组织特性，其所在组的硬膜外瘢痕的增生程度较对照组明显减轻。
　　结论：
　　1、PBLG多孔微球具有良好的生物学特性，能调控hFBs中的COL1、COL3以及IL-8基因的表达；
　　2、PBLG多孔微球可作为构建皮下组织工程化脂肪组织的支架材料，适合于软组织缺损的充填；
　　3、利用rASCs与PLGA/CS支架构建的脂肪组织，可预防硬膜外瘢痕粘连的增生。

目录

声明

中英文缩写一览表

绪论

参考文献

第一章 PBLG微球的生物学特性和组织相容性初步研究

前言

1.1 主要试剂与仪器

1.2 实验方法

1.3 实验结果

1.4 讨 论

本章结论

参考文献

第二章 应用人ASCs和PBLG微球支架构建具有脂肪小叶样结构的血管化脂肪组织

前言

2.1 主要试剂与仪器

2.2 实验方法

2.3 结 果

2.4 讨 论

本章结论

参考文献

第三章 应用新西兰大白兔ASCs和PLGA/CS支架构建硬膜外脂肪组织的实验研究

前言

3.1 主要试剂与仪器

3.2 实验方法

3.3 结 果

3.4 讨 论

本章结论

参考文献

全文结论

致谢

攻读博士学位期间发表论文、会议发言、获得专利及申请项目