血红素加氧酶-1调节CD4+T细胞亚群拮抗过敏性哮喘的实验研究

摘要

【目的】：建立哮喘小鼠模型，选用氯化高铁血红素（hemin）干预血红素加氧酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）表达，探讨HO-1在哮喘气道炎症中的抗炎及其对T辅助细胞（T helper cells，Th）1、Th2、Th17和调节性T细胞（regulatory T cells，Treg）的调节作用。
　　【方法】：用卵清蛋白（ovalbumin，OVA）致敏、激发Balb/C小鼠制备哮喘动物模型，并经hemin诱导HO-1高表达。通过肺脏组织病理分析，血清OVA特异性IgE水平测定，肺泡灌洗液（bronchial alveolar lavage fluid，BALF）中炎症细胞分类及计数以了解小鼠气道炎症变化；Western Blot和Real-time PCR分别测定肺脏和脾脏组织中HO-1基因表达和蛋白水平，肺脏组织Th1、Th2、Th17及Treg分泌的相关细胞因子和特异性转录因子基因表达水平；流式细胞术分析脾脏各CD4+T细胞亚群。
　　【结果】：实验结果显示，经致敏、激发后（OVA组），小鼠肺脏和脾脏HO-1表达较Control组增高，hemin干预后（OVA+Hemin组），HO-1蛋白表达进一步升高；肺脏病理组织学显示，OVA组见以EOS为主的大量炎症细胞浸润，而hemin干预后能明显缓解炎症；OVA组肺组织中T-bet及IFN-γ水平降低，但GATA-3和RORγt表达及IL-4、IL-17A和IL-6分泌水平较Control组显著增高，而hemin能逆转该结果；同时OVA+Hemin组Foxp3表达和IL-10及TGF-β水平均明显高于其余两组；脾脏流式分析结果显示OVA组可见Th2，Th17增多，Th1和Treg则略降低，hemin干预后明显逆转该结果。结论：上调HO-1表达能显著拮抗EOS性气道炎症，并通过调节Th1/Th2和Th17/Treg细胞平衡，促进TGF-β和IL-10分泌，抑制哮喘气道炎症。

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绪论

材料与方法

1.实验材料

1.1主要试剂与仪器

1.2 实验仪器

1.3 实验动物的分组

2.方法

2.1 哮喘小鼠动物模型的构建

2.2 取材

2.3 BALF细胞计数及病理组织学检测

2.4 血清OVA特异性IgE测定

2.5 Real-Time PCR检测各组肺脏及脾脏细胞因子及表达

2.6 Western blot分析肺脏及脾脏组织HO-1水平

2.7 流式细胞检测

3.统计学分析

结果

2.1 病理组织学分析

2.2 血清OVA特异性IgE浓度

2.3 BALF中细胞总数及细胞分类计数

2.4 小鼠肺脏和脾脏组织HO-1 mRNA表达水平和蛋白量

2.5 小鼠肺脏组织相关细胞因子水平

2.6小鼠肺脏组织相关转录因子表达水平

2.7 Hemin上调HO-1表达后小鼠脾脏CD4+T细胞亚群变化

讨论

结论

参考文献

致谢

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