乙型肝炎病毒PreS/S突变对聚乙二醇干扰素治疗慢性乙型肝炎持续应答的影响及其机制的研究

摘要

研究背景:慢性乙型肝炎抗病毒治疗的疗效预测及预防停药复发是近年国内外研究热点，目前乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)滴度常作为乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)阳性患者采用聚乙二醇干扰素抗病毒治疗停药的判断指标。由于乙型肝炎病毒(HBV)自身的高度变异性，HBsAg变异是否会对治疗应答和停药复发产生影响也引起了研究者的关注。另外对聚乙二醇干扰素抗病毒治疗48周应答不佳的慢性乙型肝炎患者，其优化治疗方案及疗效预测指标也尚不明确。
　　研究目的:1、研究慢性乙型肝炎患者采用聚乙二醇干扰素抗病毒治疗过程中血清HBV分离株包膜蛋白前S/S区(PreS/S)准种的变异情况，并进一步分析突变株对病毒生物学表型产生的影响以探讨引起停药复发的病毒学分子机制。2、分析在聚乙二醇干扰素延长抗病毒治疗过程中患者血清HBsAg、 HBeAg及乙肝病毒DNA(HBVDNA)的变化情况，以探寻更好的抗病毒治疗持续应答的预测模型，为48周聚乙二醇干扰素治疗应答不佳的慢性乙型肝炎患者的优化治疗方案提供依据。
　　研究方法:本研究第一部分共收集98例聚乙二醇干扰素治疗12个月e抗原阳性的慢性乙型肝炎患者，其中46例在治疗结束达到e抗原血清学转换，根据治疗3个月是否S抗原≤1500 IU/ml或6个月HBsAg≤300 IU/ml且下降大于1 log，分为高S抗原滴度组及低S抗原滴度组各11例，收集两组患者在治疗过程中及复发时的系列血清标本，分析停药复发患者在治疗过程中及复发时PreS/S区准种的动态变化，体外真核表达观察PreS/S区突变对HBsAg抗原性的影响，进一步通过细胞荧光素酶实验观察PreS区突变对S区启动子的影响，并利用反式互补技术观察PreS/S区突变对病毒复制及分泌的影响，采用实时荧光Taqman双探针技术检测细胞共价闭合环状DNA(cccDNA)病毒池的变化，及细胞免疫荧光技术观察包膜蛋白在细胞中的分布情况。
　　本研究第二部分纳入81例聚乙二醇干扰素治疗48周应答不佳的HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者，延长治疗至96周，其中58例患者继续采用聚乙二醇干扰素单药治疗，23例患者加用核苷（酸）类似物联合治疗。在治疗基线、24周、48周、72周、96周及停药随访72周各时间点检测血清HBsAg、HBeAg及HBV DNA水平。
　　结果:第一部分:1、11例高S抗原滴度组停药观察48周病毒学反弹患者为7例(7/11，63.6％)，而低S抗原滴度组11例患者有4例出现病毒学反弹(4/11，36.4％)，并且低S抗原滴度组复发的患者存在PreS/S变异株的进化，其中2例基因C型的患者PreS1 G35R+F67V变异株在抗病毒治疗过程中及停药复发后逐渐成为优势株，而另2例基因B型的患者均出现了S P127T变异位点。2、体外实验证实P127T突变能降低乙肝病毒的抗原性，可造成HBsAg的检测滴度下降;而PreS1G35R+F67V突变株在胞内合成的cccDNA较野毒株增加，进一步分析表明这种发生在S启动子区的突变可通过下调S启动子的转录活性导致主蛋白(SHBs)表达量的降低，从而改变大蛋白(LHBs)/SHBs的比例，影响包膜蛋白的表达及病毒的分泌，促进细胞内cccDNA合成。
　　第二部分:1、在聚乙二醇干扰素延长治疗的81例患者中有26例(32.1％)达到持续病毒学应答（停药随访72周患者血清HBV DNA载量低于检测下限95 IU/ml），而对于聚乙二醇干扰素单药治疗或核苷（酸）类似物联合治疗的患者间持续病毒学应答率无统计学差异;2、治疗48周血清HBsAg小于1800IU/ml显示出对持续病毒学应答的预测价值，此时持续应答的受试者曲线下面积(AUC)为0.727，联合72周血清HBsAg小于1500IU/ml及HBeAg阴转其持续应答的AUC值可提高至0.753。
　　结论:在慢性乙型肝炎患者聚乙二醇干扰素抗病毒治疗过程中，PreS/S突变株可通过改变包膜蛋白的表达和病毒分泌，进而促进胞内cccDNA合成或通过影响HBsAg的抗原性从而降低其与表面抗体的结合能力，为病毒长期持续存在提供生存优势。对聚乙二醇干扰素治疗48周应答不佳的慢性乙型肝炎患者，延长聚乙二醇干扰素单药治疗或加用核苷（酸）类似物联合治疗，可提高这部分患者的持续病毒学应答率;监测治疗48周血清HBsAg及72周血清HBsAg和HBeAg水平能有效预测这部分患者的持续病毒学应答情况。

目录

声明

摘要

符号说明

第一部分 乙型肝炎病毒PreS／S突变对聚乙二醇干扰素抗病毒治疗持续应答的影响及其机制研究

引言

研究对象与方法

结果

讨论

结论

第二部分 聚乙二醇干扰素延长治疗e抗原阳性慢性乙型肝炎患者持续应答的预测指标

引言

研究对象与方法

结果

讨论

结论

参考文献

攻读博士学位期间取得的学术成果

致谢