还原型谷胱甘肽对C57BL/6J小鼠新鲜精子和冻融精子体外受精影响的研究

摘要

体外受精和精子冻存技术是有效储存和繁育基因工程小鼠的方法。大部分基因工程小鼠是以C57BL/6小鼠为遗传背景而建立的，然而冻存的C57BL/6J小鼠精子的体外受精能力显著降低。在本研究中，我们分别配置含不同浓度的GSH的体外受精液，以不含谷胱甘肽的受精液为对照，然后对C57BL/6J小鼠新鲜精子和冻融精子进行体外受精，观察不同浓度GSH对体外受精率、囊胚率和小鼠出生率的影响。结果显示添加GSH能够显著提高C57BL/6J小鼠新鲜精子和冻融精子体外受精率，并对体内外的胚胎发育无影响。然后选取5种以C57BL/6J小鼠为遗传背景的基因工程小鼠进行上述实验，验证了上述方法在实际应用中的可行性。为探索GSH对体外受精的促进作用的作用机理，我们分别研究了组成GSH的三种氨基酸对C57BL/6J小鼠冻融精子体外受精、囊胚发育和小鼠出生率的影响，同时，我们还观察了GSH和组成GSH的三种氨基酸对卵母细胞透明带上巯基含量的影响，结果显示半胱氨酸和GSH对冻存精子体外受精所起的促进作用与透明带上的巯基数量增加相关联。因此我们认为添加GSH对能够促进C57BL/6J新鲜精子和冻存精子的体外受精，所起的促进作用是通过GSH上的巯基和透明带上的二硫键相互作用而实现的。

目录

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英文缩略词

第一章 引言

1.1 C57BL/6小鼠介绍及应用

1.2 体外受精(IVF)

1.3 精子冻存

1.4 自由基

1.5 谷胱甘肽(GSH)

1.6 本实验研究的目的和意义

第二章材料与方法

2.1 实验动物

2.2 主要仪器和设备

2.3主要试剂和配制

2.4 试验方法

2.5试验设计

2.6 数据处理

第三章实验结果

3.1 不同浓度的GSH对C57BL/6J小鼠新鲜精子体外受精、囊胚率和小鼠出生率的影响

3.2 不同浓度的GSH对5种以C57BL/6J为遗传背景的基因工程小鼠新鲜精子体外受精、囊胚率和小鼠出生率的影响

3.3 不同浓度的GSH对C57BL/6J小鼠冻存精子体外受精、囊胚率和小鼠出生率的影响

3.4 不同浓度的GSH对5种以C57BL/6J为遗传背景的基因工程小鼠冻融精子体外受精、囊胚率和小鼠出生率的影响

3.5 不同浓度的Glu、Cys和Gly对C57BL/6J小鼠新鲜精子体外受精、囊胚率和小鼠出生率的影响

3.6 浓度为1mmol/L的GSH、Glu、Cys和Gly对C57BL/6J小鼠卵母细胞透明带上巯基含量的影响

第四章 讨论

4.1 不同浓度的GSH对小鼠新鲜精子和冻融精子的体外受精的影响

4.2 GSH对C57BL/6J小鼠体外受精的作用机理初探

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的论文