5-HT对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)肠道运动影响的初步探究

摘要

中华绒螯蟹，俗称河蟹、毛蟹、大闸蟹。因其营养价值高，味道鲜美，受到广大消费者的喜爱，是我国的名特优水产品，已经成为全球主要的经济品种之一。中华绒螯蟹的健康生长与消化生理的正常运行分不开。但是对其消化系统的研究还很少，5-HT作为一种极其重要的生物胺，在甲壳动物的消化系统中广泛分布，但是关于5-HT在消化系统中怎样发挥作用还几乎为空白。本文首先对5-HT在血清、眼柄、脑神经节肠道等7种重要组织中的含量进行了分析并对肠道内5-HT的1，2受体及与5-HT功能密切相关的ACHE和NOS进行免疫定位，然后对5-HT调节食物运行时间的影响进行了研究；Cajal间质细胞（ICC）是一种特殊的间质细胞，对消化系统平滑肌活动的收缩起着重要的调节功能,甲壳动物消化系统中是否存在这种细胞,发挥何种功能还未有报道。本研究首先观察了中华绒螯蟹肠道是否存在 ICC，进而通过饥饿观察 ICC的变化，以期为甲壳动物 ICC的研究奠定基础。 本研究的主要内容与结果如下： 1、5-HT在中华绒螯蟹主要组织中（血清、眼柄及脑神经节等）的含量及肠道中相关受体和递质的免疫定位研究 1)本实验通过液相及ELISA的方法测定血清、眼柄及脑神经节内5-HT含量的变化，结果如下： a、从6:00到24:00的24h内，血清内5-HT含量显著下降； b、同一时间点，脑神经节内5-HT的含量高于眼柄；脑神经节内5-HT的变化趋势与血清相似，眼柄内5-HT的变化趋势略有差异。 2）本实验通过液相测定了摄食前、摄食中及排便后中华绒螯蟹肝胰腺、肠道及胸神经节内5-HT含量的变化，结果如下： a、在同一摄食状态下，肝胰腺内5-HT的含量显著高于肠道及胸神经节； b、肝胰腺内5-HT的含量在摄食前含量最高，摄食中显著下降，而排便后含量回升。肠道及胸神经节内5-HT的含量在不同摄食状态下没有显著改变。 3）通过免疫组化方法鉴定了肠道内5-HT1A、5-HT2A、ACHE、NOS1和NOS3分布及肝胰腺内5-HT2的分布，通过银染法鉴定肠道及肝胰腺内5-HT细胞，结果如下： a、5-HT2A在肠道及肝胰腺内的分布与5-HT在肠道及肝胰腺中的分布类似；而5-HT1A在肠球的分布主要在结缔组织内，而5-HT在肠球的上皮细胞中也有阳性分布。 B、 ACHE免疫阳性细胞在中肠的粘膜上皮细胞间有分布；在肠球主要分布在外周发达的结缔组织中；在后肠主要分布在粘膜上皮细胞间和粘膜下层及肌层，均为胞核着色，在中肠及肠球内ACHE的分布与5-HT的阳性分布有差异，而在后肠的分布一致。 C、 NOS1免疫阳性细胞在中肠，主要分布在黏膜下层和肌层，而NOS3，除在上面两个组织中有分布，在上皮细胞中也有分布；；在肠球，NOS1阳性细胞在外周发达结缔组织中呈网络状分布，而NOS3则在黏膜的上皮细胞呈阳性分布；在后肠，NOS1阳性细胞主要分布在黏膜下层和肌层，而NOS3则主要分布在肌层，并且都成片网状分布。 D、本研究通过改良型De Grandi硝酸银染色法及Grimelius硝酸银法染色鉴定中华绒螯蟹嗜银细胞，在肠道中并未发现嗜银细胞，通过Grimelius硝酸银法在肝胰腺内发现成群或单个存在的嗜银细胞。 25-HT对中华绒螯蟹食物运行时间、组织内5-HT及肠道内ACH和NO含量的影响 1）本实验采用摄像观察外源注射5-HT及其激动剂和拮抗剂后中华绒螯蟹食物运行的时间 a、本实验发现5-HT可以减短食物在胃肠道内的运行时间，5-HT2A的激动剂a-methyl-5-HT可以进一步缩短食物在胃肠道内运行的时间；这表明5-HT参与食物运行； b、眼柄切除后，延长了食物中华绒螯蟹胃肠道内的运行时间； 2）本实验检测了5-HT注射后不同摄食状态下中华绒螯蟹肠道、肝胰腺和胸神经节内5-HT的变化及肠道内ACH和NO含量的变化。 A、外源注射5-HT后提高了中华绒螯蟹排便后肠道内5-HT的含量； b、外源5-HT减少了中华绒螯蟹排便后5-HT2A受体在肠球及后肠内的含量； c、外源5-HT降低了中华绒螯蟹摄食中ACH和NO的含量，尤其是NO的含量。 3与肠道收缩密切相关的肠道间质（Cajal）样细胞形态的初步研究 1）通过透射电镜法观察中华绒螯蟹后肠结构及Cajal样细胞的形态,结果如下： a初步观察了中华绒螯蟹后肠组织超微结构，由内至外为黏膜层，黏膜下层，肌层与外膜，颗粒细胞在固有膜及肌肉层中有分布，形态主要为圆形及卵圆形；ICC样细胞在黏膜层与黏膜下层，黏膜下层与肌层，肌层与肌层之间，肌肉束外有分布，形态主要为梭形，纺锤形，也有不规则形。突触有两个或两个以上，与邻近的细胞连接方式多为缝隙连接，胞核异染色质明显，富含线粒体，光面内质网和粗面内质网。 2)在饥饿条件下，通过碘化锌锇酸法及透射电镜法观察中华绒螯蟹后肠内 ICC细胞的变化，结果如下： a、通过碘化锌锇酸法发现随着饥饿时间的延长，中华绒螯蟹后肠粘膜下层 Cajal间质细胞的分布呈上升趋势。 B、饥饿后，后肠上皮细胞由单个细胞核变为多个细胞核；后肠的 ICC样细胞细胞器含量明显减少；随着饥饿时间的延长，肌肉消融明显。

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引言

第一章5-HT对中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）肠道运动影响相关研究及Cajal间质细胞的研究进展

1 5-HT在甲壳动物中枢神经和消化系统的分布

2 5-HT在甲壳动物生理功能的调节作用

3乙酰胆碱（ACh）、一氧化氮（NO）及5-HT消化系统功能调节中的相互联系

4 Cajal间质细胞形态、分布及功能及饥饿对甲壳动物生理的影响

5 饥饿对甲壳动物生理的影响

第二章 5-HT在中华绒螯蟹主要组织中（血清、眼柄及脑神经节等）的含量及肠道中相关受体和递质的免疫定位研究

第一节 24h内中华绒螯蟹血清、眼柄及脑神经节内5-HT含量的变化

第二节 不同摄食状态下肝胰腺、肠道和胸神经节内5-HT含量的变化

第三节 肝胰腺内5-HT2A的免疫定位及肠道内5-HT2A和5-HT1A的免疫定位

第四节 肠道中ACHE,NOS1及NOS3的组织定位

第五节 银染法检测中华绒螯蟹肠道嗜银细胞初探

小结

第三章 5-HT对中华绒螯蟹食物运行时间、组织内5-HT及肠道内ACH和NO含量的影响

第一节 外源注射5-HT及其激动剂和拮抗剂对中华绒螯蟹食物运行时间的影响

第二节 5-HT对中华绒螯蟹不同摄食状态下组织内5-HT及肠道内5-HT2A受体、和ACH和NO含量的影响

小结

第四章 与肠道收缩密切相关的肠道间质（Cajal）样细胞形态的初步研究

第一节 透射电镜下后肠上皮细胞、颗粒细胞及Cajal样细胞的形态观察

第二节 饥饿对中华绒螯蟹Cajal样细胞的形态变化的影响

小结

参考文献

致谢