人TNF-α嵌合抗体体外亲和力成熟作用研究

摘要

该论文的创新点:通过不同试验方法体外获得亲和力提高的新型抗人TNF-α嵌合抗体,并保持抗体的中和功能不变;建立基于抗原抗体相互识别的立体结构信息预测判断抗体亲和力及抗原识别位点的新方法;尝试在计算机模建基础上,通过定点突变进一步提高抗体亲和力.人肿瘤坏死因子α(hTNFα)是一种由单核、巨噬、T淋巴、中性粒、肥大或内皮细胞分泌产生的细胞因子,可介导多种生物学活性.当hTNF-α在体内的大量产生和释放可引起机体免疫平衡失调,并可与其它炎症因子一起产生多种病理损伤.该研究组于上世纪八十年代已经制备得到抗hTNFα鼠源单克隆抗体(McAb)Z12,具有中和hTNFα细胞毒性功能,其亲和力在K<,a>=8×10<'7>L/mol.在其人源化过程中,抗体的亲和力有显著地降低.该课题借助链替换(Chain Shuffling)方法,以鼠源抗体Z12为母本,通过噬菌体抗体库技术亲和筛选,借助计算机合理设计获得高亲和力嵌合抗体CH22,以期达到在保持抗体中和活性的同时显著提高抗体亲和力的目的.同时借助计算机模建得到的抗原(hTNF-α)与抗体(CH22)相互作用的立体结构信息,通过点突变得到新的人源化抗体,进一步提高抗体亲和力和抗体中和活性.通过以上研究,获得抗hTNF-α高亲和力嵌合抗体,与Z12比较亲和力最高提高750倍,比Remicade(R)亲和力提高6倍;其识别hTNF-α功能表位不同于Remicade(R),但中和hTNF-α活性能力与Remicade(R)相同.嵌合抗体CH22与已公开发表的抗体均有所不同,具有独立知识产权,此方面研究申请一项发明专利.

目录

英文缩写及中英文合名对照表

引言

第一部分噬菌体抗体库(k/Z12)和噬菌体抗体库(H/Z12)的构建及亲和筛选

1材料和方法

2结果

3讨论

小结

第二部分抗hTNF-α抗体H22表达和功能研究

1材料和方法

2结果

3讨论

小结

第三部分定点突变对抗hTNF-α抗体亲和力成熟作用研究

1材料和方法

2结果

3讨论

小结

总结

参考文献

致谢

附录一

附录二

博士期间撰写及已发表文章