施普善对基因差异表达的影响及吲哚类化合物抗焦虑作用的综合评价

摘要

施普善对基因差异表达的影响.该实验用mRNA差异显示技术考察了施普善对大鼠PC12细胞基因差异表达的影响.通过对3条锚定引物和8条随机引物的组合,将正常组与施普善组作用组细胞总RNA进行反转录与扩增.PCR产物上聚丙烯酰胺凝胶电泳,采用银染色法分离差异表达的条带.经过基因重组克隆和测序后进行同源性检索,共发现两条经施普善作用后表达上调的基因片段,用地高辛标记片段作为探针进行斑点杂交方法对这两条片段进行了验证,结果表明片段B211是由施普善诱导表达的新的基因片段,提示此基因有可能是施普善发挥其药理学作用的潜在的分子靶标.第二部分,吲哚类化合物抗焦虚作用的综合评价.该课题运用生化,分子与行为药理学技术手段对该所合成吲哚类部分化合物的受体结合活性,抗焦虑作用效果及作用机制进行了综合评价.1.受体结合实验研究.2.行为效应研究.

目录

前言

本课题技术路线

材料与方法

1.材料

2.实验方法

2.1细胞培养与给药

2.2细胞总RNA的提取与鉴定

2.3mRNA差异显示

2.4差异片段的回收与重扩增

2.5差异片段的克隆与筛选

2.6质粒的提取

2.7点杂交鉴定差异片段的表达情况

2.8 测序及同源性检索

2.9同源性比较

试验结果

1.mRNA差异显示

2.重组克隆提取质粒与酶切鉴定

3.斑点杂交分析

附图

讨论与结论

参考文献

第二部分：吲哚类化合物的抗焦作用的综合评价

前言

第一章吲哚类化合物的受体结合实验

1.材料

2.实验方法

3.结果

(1)PK1195与受体结合的饱和曲线

(2)化合物PK1195结合的抑制作用

参考文献

第二章行为实验

1.材料

2.实验方法

(1)小鼠高架十字迷宫实验

(2)小鼠明暗穿箱实验

(3)大鼠Vogle饮水实验

(4)吗啡戒断焦虑大鼠模型

(5)小鼠自主活动性试验

(6)印防己毒素致惊厥试验

附图

实验结果

(1)吲哚类化合物的小鼠高架十字迷宫实验结果

(2)小鼠明暗穿箱实验结果

(3)大鼠Vogle饮水实验结果

(4)吲哚类化合物的吗啡戒断大鼠Vogle饮水实验结果

(5)吲哚类化合物的小鼠自主活动性试验结果

(6)印防己毒素致惊厥试验

4.讨论

参考文献

第三章吲哚类化合物作用机制研究

一吲哚类化合物I20及-1-27对大鼠血清及脑内神经类固醇体内孕酮含量的影响

1.材料

2.实验方法

实验结果

4.讨论

参考文献

二神经类固醇及吲哚类化合I20对皮质酮诱导大鼠PC12细胞损伤的影响

1.材料

2.实验方法

3.结果

4.讨论

参考文献

三应激时大鼠脑内促肾上腺皮质激素CRFmRNA表达及药物的干预及I20与抗郁剂的作用

1.材料

2.实验方法

3.实验结果

4.讨论

参考文献

第四章结论

综述1.神经类固醇对学习记忆与应激性情绪反应的调控作用

综述2.抗焦虑剂作用靶点研究进展

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