防治Alzheimer病药物作用基因靶标的发现及初步研究

摘要

以Alzheimer病(Alzheimer's disease,AD)为代表的神经退行性疾病已成为严重危害人类健康的四大杀手疾病之一.为寻找可用于防治AD药物筛选与研究的基因靶标,该研究以快速老化模型小鼠SAMP8为模型,从与中枢学习功能密切有关的脑区-海马差异表达基因筛选出发,构建快速老化模型小鼠海马的抑制消减cDNA文库.在此基础上,制备了差异表达基因的cDNA芯片,对消减文库进行分析和筛选,并以表达序列标签(EST)进行生物信息学分析和验证.然后,应用所制备的基因芯片,研究了中药复方六味地黄汤和石杉碱甲对SAMP8海马差异表达基因的影响,并对其药物反应基因进行了比较,探讨了SAMP8海马中可用于防治AD药物筛选和研究的潜在基因靶标,为进一步深入研究打下了基础.该研究共分为五部分,一是采用高效分离差异表达基因的抑制消减杂交技术,建立了12月龄雄性SAMR1和SAMP8海马的抑制消减文库;二是利用所建文库的克隆,制作了海马差异表达基因的cDNA芯片,为后续筛选提供了手段;三是运用生物信息学技术对所获得的差异表达基因进行了分析;四是选择部分差异表达基因,利用荧光实时定量RT-PCR方法进行基因表达差异的验证,对所制备芯片筛选结果的有效性和可靠性进行了确证;五是利用所制作的芯片研究了六味地黄汤和石杉碱甲对海马差异表达基因的影响,明确上述两个药物的反应基因.

目录

缩略语表

前言

第一章材料与方法

一、实验材料

二、实验方法

(一)快速老化模型小鼠SAMR1和SAMP8海马抑制消减文库的构建

(二)cDNA芯片的制备及对SAMR1和SAMP8海马抑制消减文库的筛选

(三)SAMR1和SAMP8海马差异表达基因的测序与生物信息学分析

(四)SAMR1和SAMP8部分差异表达基因的实时定量RT-PCR鉴定

(五)六味地黄汤和石杉碱甲对SAMP8海马差异表达基因的影响

第二章实验结果

一、快速老化模型小鼠SAMR1和SAMP8海马抑制消减文库的构建

二、cDNA芯片的制备及对SAMR1和SAMP8海马抑制消减文库的筛选

三、SAMR1和SAMP8海马差异表达基因的测序与生物信息学分析

四、SAMR1和SAMP8部分差异表达基因的实时定量RT-PCR鉴定

五、六味地黄汤和石杉碱甲对SAMP8海马差异表达基因的影响

第三章讨论

第四章结论

参考文献

学习记忆相关基因研究进展

衰老相关的学习记忆障碍动物模型——SAMP8的研究进展

个人简历

致谢