人CD40-Ig融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达及其功能的初步研究

摘要

目的:利用哺乳动物表达系统表达并纯化获得人CD40-Ig融合蛋白,进而以该融合蛋白为工具,研究阻断CD40/CD40L相互作用对T淋巴细胞功能和小鼠GVHD转归的影响.结论:利用RT-PCR技术成功地克隆了人CD40和CD40L分子基因.将CD40胞外区基因插入pIG1载体中,构建成功CD40-Fc融合基因的真核瞬时表达载体,在COS-7细胞中获得表达.CD40-Fc融合基因插入pcDNA3.1中构建成功真核稳定表达载体,转染CHO细胞后经筛选和克隆化获得了稳定表达CD40-Ig的工程细胞株;经无血清大规模培养和亲和层析纯化获得高纯度的CD40-Ig融合蛋白.与人IgG抗体对照相比,CD40-Ig融合蛋白显著抑制CFU-T形成,却对人T淋巴细胞转化能力、CFU-GM形成能力没有影响.CD40-Ig融合蛋白对GVHD小鼠有一定保护作用,可显著延长GVHD小鼠的平均存活时间.

目录

英文缩写词表

前言

第一部分人CD40和CD40L基因的克隆及CD40分子在COS-7细胞中的表达与鉴定

1.材料和方法

2.结果

3.讨论

第二部分人CD40-Fc融合基因在COS-7细胞中的表达与鉴定

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

第三部分CD40-Fc融合基因在CHO细胞中的表达及纯化

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

第四部分CD40-Ig对T细胞功能及CFU-GM形成的影响

1.材料与方法

2.结果与讨论

第五部分阻断CD40/CD40L相互作用对小鼠GVHD转归的影响

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

结论

参考文献

致谢

文献综述

1.从现代科技革命特点看我国骨髓移植发展前景

2.移植物抗宿主病研究的进展

3.CD40/CD40L途径：免疫细胞活化的分子机制及潜在应用

附录：攻读博士学位期间发表文章情况