亚甲蓝光化学法灭活血浆中丙型肝炎病毒的分子生物学机理

摘要

本文对亚甲蓝光化学法灭活血浆中丙型肝炎病毒的分子生物学机理进行了研究。文章构建了分别插入HCV 5’-NCR和C区基因、NS<,2>基因片断的2个重组质粒，鉴定后进行体外转录试验。将体外转录的HCV RNA分别用代血浆(羟乙基淀粉20-氯化钠注射液，HES20)和PBS缓冲液稀释至与血浆所含病毒相近的浓度(≥10<'5>copies)，在无除核酸以外的病毒构件及病毒蛋白成分的条件下进行与前述实验条件相同的MB-P处理。结果发现，体外转录HCV RNA在MB-P处理下依然能发生降解，在处理20分钟内可检测到的核酸量从3.2×10<'5>copies/ml降低到6.2×10<'4>copies/ml，处理60分钟后降低至2.0×10<'4>copies/ml，表明MB-P方法能直接作用于核酸，使核酸发生降解从而达到病毒灭活的目的。同时，血浆中病毒的核酸降解速率明显快于HES20和PBS中的体外转录HCV RNA，提示除核酸以外的某些病毒构件或蛋白可能会影响MB-P对HCV RNA的作用效率。

目录

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摘要

第一部分 综述

第一章亚甲蓝光化学法灭活血浆的研究进展

第二章实时荧光定量PCR技术初探

第二部分 实验

前 言

材料和方法

结果与分析

一、用PCR法初步观察MB-P处理后HCV RNA随处理时间的变化

二、定量研究MB-P处理后病人血浆HCV RNA 的动态变化：

二、HCV克隆的构建

三、体外转录HCV RNA

讨论

参考文献

致谢

附 录