核酶和RNA干扰靶向治疗慢性粒细胞性白血病的实验研究

摘要

研究目的 利用带有导引序列(GS)的RNase P亚单位M1RNA(M1-GS RNA)和RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)靶向作用于具有特征性靶基因BCR-ABL mRNA的慢性粒细胞性白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)细胞株K562细胞,观察它们对于靶基因及其表达产物的切割效果及细胞凋亡的变化,探索CML靶向治疗的新方法.研究方法 1.构建M1-GS RNA细胞外切割实验和含M1-GS RNA模板序列真核表达载体 2.检测pAVGS4转染K562细胞后不同时间BCR-ABL mRNA和p210表达的变化 3.检测转染核酶后不同时间细胞凋亡的变化:4.含有siRNA模板序列RNA表达载体的构建及对K562细胞的作用效应 研究结论 1.该实验已成功构建含有M1-GS RNA模板序列的真核表达载体pAVGS4,进行细胞外切割实验显示具有特异性切割底物的效应;2.将pAVGS4转染K562细胞株后发现M1-GS RNA具有特异性切割BCR-ABL mRNA作用,而且随着时间的延长切割效率增加,但72小时和96小时时作用接近;进行p210蛋白检测,发现M1-GS RNA可以有效地下调该蛋白质的表达.3.应用多种方法检测发现转染pAVGS4可以有效地诱导K562细胞凋亡,在转染24小时后随着时间的延长,实验组的凋亡率显著增加;表明M1-GS RNA具有有效、特异地抗K562细胞的作用.4.该实验成功构建了含有针对BCR-ABL mRNA siRNA模板的pBCR6,转染K562后应用不同的凋亡检测方法发现pBCR6可以有效地诱导K562细胞凋亡.5.实验研究提示M1-GS RNA和RNAi有望成为CML分子靶向治疗的新方法.

目录

前言

第一部分M1-GS RNA细胞外转录载体的构建和体外切割实验

材料与方法

结果

讨论

第二部分M1-GS RNA在RNA和蛋白质水平对K562细胞的影响

材料和方法

结果

讨论

第三部分 抗BCR——ABLmRNA酶对K562细胞凋亡效应的研究

材料和方法

结果

讨论

第四部分应用RNAi诱导K562细胞凋亡的研究

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

致谢

综述

附录一英文缩写和简写注释

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