利用GAL4-UAS系统在果蝇中研究人类基因功能

摘要

人类基因组草图基本完成,大量的新基因只有确定的序列及基因组定位信息.新的焦点是要阐明这些基因的功能,果蝇对此起重要作用.该研究利用转基因果蝇和GAL4-UAS系统初步鉴定功能基因.首先建立了源于11个人类基因的共58个转基因果蝇品系,然后用6种不同的GAL4诱导这些转基因在果蝇中过量表达.两个人类基因过量表达时会导致果蝇表型异常.其中过量表达1v-16(与延伸因子1α1[translation elongation factor alpha 1,EF1α-1]编码相同的开放阅读框)的转基因果蝇表现出异常背板和糙眼;morc14-8过量表达则导致果蝇背板异常和背部刚毛脱落表型.这些结果表明在果蝇中基因过量表达策略可用于人类功能基因的初筛,从而为大规模研究人类基因的功能提供了一种新手段.

目录

第一部分利用GAL4-UAS系统在果蝇中研究人类基因功能

前言

模式生物—果蝇

GAL4-UAS表达系统

GAL4-UAS系统的应用

材料与方法

1材料

2方法

结果

1 pUAST-cDNA质粒构建

2转人类基因UAS果蝇品系的建立及其表型观察

3EF-1α1(1v-16)基因的过量表达表型

4 14-8基因的过量表达表型

讨论

1 GAL4-UAS系统研究人类基因功能的可行性

2 GAL4-UAS系统筛选的局限性

3 EF-1α1基因表型分析

第二部分morc14-8基因功能初步分析

前言

WH2结构域

FH蛋白

CAAX框序列

本部分实验设计

材料与方法

1材料

2方法

结果

1ptc-GAL4诱导的morc14-8过量表达表型分析

2其它GAL4品系诱导的morc14-8过量表达表型分析

3morc14-8生物信息学研究

4 morc14-8在人类293细胞中的表达

5 morc14-8突变分析以及进一步研究设计

参考文献

附录人类基因cDNA BLAST分析

致谢

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