胰腺癌甲基化CpG结合域蛋白MBD1的表达、意义及其转录调控研究

摘要

作为一个重要的转录调控因子,胰腺癌中甲基化CpG结合域蛋白MBD1介导的甲基化转录抑制作用可能是造成众多抑癌基因转录表达下降,以至失活的重要原因.MBD1在胰腺癌中的表达、调控及其作用有重要的研究价值.通过RT-PCR检测MBD1mRNA在两株胰腺癌细胞株AsPC-1和BxPC-3中的表达,发现均有较高水平的基础表达.BxPC-3为原发癌细胞株,而AsPC-1具有很高的淋巴结转移侵袭活性,并同时具有原发癌的生物学特性,提示MBD1与胰腺癌的高转移侵袭活性有关,因此选择AsPC-1细胞株作为研究平台,进一步在基因水平调控MBD1的表达.我们利用RNA干扰技术,设计合成了针对MBD1基因的siRNAs,并在其上下游分别引入BgLⅡ和HindⅢ限制性酶切位点,通过双酶切连接反应将MBD1siRNAs插入质粒载体Rotro Super多克隆位点中的BgLⅡ和HindⅢ之间,从而成功构建MBD1siRNAs真核表达质粒Rotro Super-MBD1siRNAs,应用RT-PCR行酶切鉴定,结果显示MBD1siRNAs成功载入质粒.采用脂质体介导的方法将MBD1siRNAs表达质粒转染胰腺癌细胞系AsPC-1,通过G-418的筛选获得稳定表达MBD1siRNAs的阳性克隆.总之,研究证实MBD1在胰腺癌中的表达明显增高,并与胰腺癌转移侵袭活性相关,是致癌密切相关基因.MBD1siRNAs能抑制胰腺癌细胞MBD1基因的表达及其增殖能力,并可上调其它甲基化相关抑癌基因表达.区域性动脉灌注化疗明显抑制MBD1基因的表达.

目录

前言

第一部分RNA干扰(RNAi)对胰腺癌细胞株AsPC-1中甲基化CpG结合域蛋白MBD1表达的影响

一、材料

二、方法

三、结果

讨论

小结

第二部分MBD1siRNA对胰腺癌细胞生物学特性的影响

一.材料

二.方法

三.结果

讨论

小结

第三部分MBD1在胰腺癌中的表达、意义及区域动脉灌注介入化疗对MBD1基因表达的影响

一、材料

二、方法

三、结果

讨论

小结

参考文献

文献综述

胰腺癌基因治疗的新近研究

基因甲基化与肿瘤研究

RNAi技术在基因干扰研究中的应用

参考文献

发表论文

胰腺癌术前介入治疗作用的探讨

亚胺培南-西司他丁治疗胰腺癌扩大根治术后并发重症腹腔感染24例临床分析

致谢

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