同种异体与同基因骨髓间充质干细胞（MSC）体内移植免疫反应的比较研究

摘要

目的：比较同种同基因与同种异基因骨髓间充质干细胞(MSC)体内移植的免疫反应，通过比较两者间的差异来研究同种异体骨髓间充质干细胞皮下移植是否存在免疫反应，探讨骨髓间充质干细胞异体移植的可能性。 方法：分别取6周龄BALB/C品系小鼠和转EGFP基因的C75BL\6品系小鼠的骨髓，应用全骨髓培养+差速贴壁分离法获取骨髓间充质干细胞，经稳定传代至第五代后，以相同的浓度融入藻酸钠溶液中，构建MSC—藻酸钙复合物，植入BALB/C品系小鼠背部皮下，另单纯藻酸钙植入作为阴性对照。分别于1．2．4．8周取小鼠外周血行流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群变化，同时将小鼠背部植入物取出，做冰冻切片，行HE及CD4、CD8抗原免疫组化染色，观察植入物内T淋巴细胞亚群的变化，带有GFP蛋白的细胞组切片在荧光显微镜下观察并计数存活细胞数。 结果：流式细胞仪检测MSCs表达MHC-Ⅰ类分子，不表达MHC-Ⅱ类分子及CD40、B7(CD80/CD86)等T细胞活化的协同信号分子。外周血T淋巴细胞亚群分析：P、G组血标本各时间段CD4<'+>/CD8<'+>比值及CD4<'+>值无差异，1周及4周CD8<'+>值无差异，2周时G组CD8<'+>高于P组(P<0.05)。免疫组化检查显示试验组1、2周时标本可见CD4<'+>，CD8<'+>细胞少量表达，以2周时较为明显，4周时明显减少，8周时基本消失，同种异体与同种同基因组淋巴细胞亚群变化无显著差异。荧光显微镜下见表达GFP蛋白的MSCs随着植入时间的增加逐渐减少，初期减少速度快，后期减少的速度渐慢，8周时仍可见表达GFP蛋白的MSCs。 结论：小鼠MSCs植入同种异体小鼠皮下8周后仍能存活，MSCs在体内保持低免疫原性的特点，同种异体与同种同基因MSCs在诱导机体免疫应答方面无明显差异。异体MSCs可能因其免疫抑制性质成为优秀的骨组织工程的种子细胞。

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