p53基因的突变、R72P多态以及MDM2基因的SNP309多态与肝癌发生及预后的关系研究

摘要

肝癌是世界上发病率居第六位而死亡率居第三位的常见恶性肿瘤,全世界半数以上的肝癌病人集中在中国,其致死率居我国所有肿瘤的第二位。抑癌基因p53是迄今为止发现与人类肿瘤相关性最高的基因。P53的功能常常因为突变而失活,在肝癌中的突变率约50％。同时,研究表明p53通路中某些基因的功能型单核苷酸多态(SNPs)同样也能影响p53的活性。但是p53基因突变和p53通路中相关SNPs与肝癌发生及预后的关系如何,现尚未有明确结论。
　　本研究通过直接测序p53基因全部编码外显子的方法,在360例肝癌中,发现177例(占49.2％)有p53基因突变,包括60种不同的突变类型,其中36种(占60％)为世界上首次在肝癌中发现。经统计分析,我们发现有肝癌家族史的病人其p53基因的突变率要显著地高于没有肝癌家族史的病人(P=0.008);p53基因突变的肝癌病人其平均发病年龄显著性早于p53基因为野生型的肝癌病人(P=0.02);同时,p53基因突变的肝癌病人其生存期要显著性小于p53基因为野生型的肝癌病人(P=0.003)。
　　本研究还通过在1375例HBV阳性的肝癌病例和2352例正常对照样本中,对p53通路中两个重要的功能型SNPs—p53-R72P多态和MDM2-SNP309多态进行基因分型,经统计分析后发现,p53-R72P多态与乙肝病人的肝癌发病风险显著相关(P=0.001),即R72P-RR型的乙肝病人其肝癌发病风险显著高于R72P-PP型的乙肝病人(OR=1.37)。经功能实验研究发现,其原因可能是HBX对P72型p53蛋白稳定性的增强作用、转录激活能力的促进作用、抑制细胞增殖能力的促进作用以及促细胞凋亡能力的促进作用等方面均强于R72型p53,而P72型p53对HBX的转录抑制作用以及促进其蛋白的泛素化降解作用均强于R72型p53。此外,我们的研究还首次发现p53-R72P多态和MDM2-SNP309与肝癌病人生存期显著性地相关,即R72P-RR基因型的病人相比R72P-PP基因型的病人其生存期要短(P＜0.05),而SNP309-GG基因型的病人相比SNP309-TT基因型的病人而言生存期要短(P＜0.05),尤其是在生存期长于2年以上的病人当中更为明显(P=0.024)。
　　本研究首次在肝癌中阐明p53因不同途径(p53自身的突变以及p53通路中的相关功能SNP)失活与肝癌的发生风险及预后的关系,这将有助于更进一步理解肝癌发生与发展的分子机制。此外,我们的研究结果显示,p53基因的突变、p53-R72P多态和MDM2-SNP309多态都与肝癌的生存期显著性的关联,因此它们可以在临床上联合应用作为肝癌的预后指标。