雷洛昔芬对去势雌性大鼠骨、子宫内膜组织的Ers、PPARγmRNA表达的影响

摘要

背景:选择性雌激素受体调节剂(SERMs)因其在不同靶组织依细胞种类和激素环境的不同,可以表现为雌激素激动剂或拮抗剂的作用而广泛受到人们的关注。雷洛昔芬(PAL)作为第二代SERM类药物,有良好的组织选择性,对骨组织具有雌激素样骨保护作用,同时不刺激生殖系统组织,不增加乳腺癌发生的危险性,正在临床推广应用中。但其在骨,子宫中所发挥的选择性作用机制仍未完全明了,尤其是对组织中雌激素受体(ER)亚型的表达的影响仍有待进一步的研究,也是研究其选择性作用的基础。另外对PPARγ(过氧化物酶体增殖物激活受体γ)在骨质疏松方面的作用研究也成了近些年的研究新焦点,并且对其的研究可能也增加对SERMs的选择性作用机制的了解。
　　 目的:研究雷洛昔芬对去势雌性大鼠的骨、子宫组织的选择性调节作用及对雌激素受体亚型α、β mRNA和PPARγ mRNA表达的影响,初步探讨其选择性作用机制。
　　 方法:将4月龄清洁级S—D雌性大鼠,随机分成四组:假手术组(SHAM),去势对照组(OVX),去势+雌激素组(OVX+E2),去势+雷洛昔芬组(OVX+PAL),每组均为10只。SHAM组开腹后仅切除双侧卵巢周围少量脂肪组织后关腹,去势组均开腹后完整切除双侧卵巢组织后关腹。术后1个月,SHAM组和OVX组均喂以蒸馏水1ml/d,OVX+E2组喂以戊酸雌二醇800μg/Kg/d,OVX+RAL组喂以雷洛昔芬1mg/Kg/d。喂养持续3个月。3月后颈动脉插管放血处死,取右股骨骨干和腰椎L6,剔净软组织,用于RT—PCR测ERα,ERβ mRNA和PPARγ mRNA；取左股骨和腰椎L1-5用于测骨密度以及取第四腰椎制成组织切片进行100倍光镜下骨组织形态观察分析；取子宫一侧宫角用于病理检测以及子宫组织形态计量检测,指标包括子宫腔上皮厚度、间质厚度、内膜厚度、子宫组织横切面面积,另一侧宫角刮下内膜,用于RT—PCR测ERα,ERβ mRNA。
　　 结果:
　　 1.骨密度(BMD):OVX组股骨和腰椎的BMD均较SHAM组显著下降,且有统计学差异。OVX+E2组和OVX+PAL组均显著提高股骨和腰椎的BMD,且都与OVX组有统计学差异。
　　 2.骨组织常规HE染色切片光镜下骨形态观察:OVX组骨小梁排列稀疏,骨髓腔内组织稀疏,可见大量脂肪细胞填充。OVX+E2组骨小梁数量尚可且排列密集,骨髓腔内脂肪细胞明显减少。OVX+RAL组骨小梁数量尚可,排列尚整齐,骨髓腔内组织尚致密,脂肪细胞较OVX组有所减少。
　　 3.骨组织ERα、ERβ mRNA水平:OVX组股骨和腰椎的ERα、ERβ mRNA的表达均明显低于SHAM组。OVX+E2组较OVX组明显提高股骨和腰椎的ERα、ERβ mRNA的表达。OVX+RAL组股骨和腰椎的ERα mRNA表达与OVX组无统计学差异,而ERβ mRNA表达均高于OVX组。
　　 4.骨组织PPARγ mRNA水平:OVX组股骨和腰椎的PPARγ mRNA的表达均明显高于SHAM组,且有统计学差异。OVX+E2组和OVX+PAL组股骨和腰椎的PPARγ mRNA的表达均明显低于OVX组,且有统计学差异。
　　 5.子宫组织形态计量检测,包括子宫腔上皮厚度、间质厚度、内膜厚度、子宫组织横切面面积的计量检测结果在OVX组均为最低,相较于SHAM组有统计学差异。OVX+E2组所有指标均高于OVX组,且有统计学差异;而OVX+RAL组所有指标与OVX组相比无统计学差异,同时明显低于OVX+E2组,有显著统计学差异。
　　 6.子宫内膜ERα、ERβ mRNA水平:子宫内膜ERα mRNA表达水平在OVX+E2组为最高,在OVX组为最低。OVX+PAL组ERα mRNA表达水平与OVX组无统计学差异,并且明显低于OVX+E2组。子宫内膜ERβ mRNA表达仅在SHAM组和OVX+E2组检测到。
　　 结论:
　　 1.皮质骨及松质骨上均有两类雌激素受体的表达。雷洛昔芬和雌激素均能提高去势雌性大鼠股骨和腰椎的骨密度,但雌激素对骨代谢的调节作用可能是通过共同作用于ERα、ERβ发挥的,而雷洛昔芬可能主要通过ERβ发挥作用,对ERα作用不明显。
　　 2.绝经后骨质疏松的发生不仅骨量减少,同时伴随骨髓腔内脂肪细胞的增多,而PPARγ可能参与了此过程的发生。雷洛昔芬和雌激素均能下调股骨和腰椎PPARγ mRNA的表达,降低骨髓脂肪化,可能是提高骨量的作用机制之一。
　　 3.子宫内膜上的雌激素受体以ERα为主。雷洛昔芬对去势雌性大鼠的子宫内膜表现为抗雌激素样作用,且主要作用于子宫内膜ERα,对ERβ表达的影响明显较弱。