大鼠尺神经损伤平面与修复时间对爪内骨骼肌影响的检测及评价研究

摘要

目的:研究SD大鼠尺神经不同损伤平面和不同修复时间对其支配的爪内骨骼肌形态学和肌细胞凋亡的影响,为法医临床学尺神经损伤鉴定合理时间的研究提供基础。通过尺神经损伤修复3个月后行爪内骨骼肌的观察,比较不同时间和不同断面尺神经损伤后的治疗效果,观察临床上延迟修复和早期修复的疗效区别以及神经损伤部位对爪内骨骼肌影响的区别。
　　 材料和方法本课题分两部分。
　　 (一)第一部分大鼠尺神经损伤平面与修复时间对爪内骨骼肌形态学的影响研究
　　 选择SD大鼠42只,以尺神经肘部和腕部平面分为两组,将两个平面的尺神经以锐器切断,建立大鼠尺神经损伤模型。大鼠左侧尺神经按照损伤后即刻、伤后1个月和伤后3个月分为三组,每组6只,在各时间组分别进行损伤尺神经缝合修复作为实验组。以大鼠右侧尺神经为实验对照组,实验对照组不予缝合修复。另设不予任何实验处理的6只大鼠为正常对照组。(设腕部尺神经损伤即刻修复组为W0,腕部尺神经损伤1个月修复组为W1,腕部尺神经损伤3个月修复组为W3,相应时间组的肘部尺神经损伤修复组为E0、E1和E3)。尺神经修复3个月后取出各组大鼠的双侧爪内肌,依次称量各组爪内骨骼肌湿重,经中性福尔马林液固定后,常规制成石蜡切片,分别进行HE染色和Masson染色,并测量爪内骨骼肌细胞的横截面积和胶原纤维占肌纤维截面积的比率。
　　 (二)第二部分尺神经损伤平面与修复时间对爪内骨骼肌细胞凋亡的影响研究
　　 选择SD大鼠42只,以尺神经肘部和腕部两个损伤平面分为两组,实验分组同第一部分。尺神经修复3个月后取出各组大鼠的双侧爪内肌,中性福尔马林固定后制成石蜡切片,进行爪内骨骼肌细胞凋亡的免疫组织化学染色观察。
　　 结果:
　　 (一)第一部分
　　 1.各组大鼠爪内骨骼肌湿重和肌细胞横截面积结果示:W0、W1、E0和E1组的左侧实验组与右侧实验对照组比较,实验侧均明显高于实验对照侧,各组差异均有统计学意义；W3和E3组的左侧实验组与右侧实验对照组比较,差异均无统计学意义。
　　 2.相同损伤部位,不同修复时间的各实验组大鼠爪内骨骼肌湿重和肌细胞横截面积结果示,正常对照组与W0组之间无明显差异,差异无统计学意义,正常对照组和W0组均高于W1和W3组,W1组亦明显高于W3组,且各组差异均有显著性统计学意义；E0、E1、E3组和正常对照组之间的比较结果与W0、W1、W3组和正常对照组之间的比较结果均一致。
　　 3.失神经支配后爪内骨骼肌中胶原纤维增多,随失神经时间延长,胶原纤维亦逐渐增多,但早期增生(即刻修复组)并不明显,到失神经1个月后开始明显增多,失神经3个月时见大量胶原纤维并可见肌肉纤维化。大鼠爪内骨骼肌中胶原纤维占肌纤维截面积比率的结果显示,W1和E1组的实验组与实验对照组比较,实验侧均低于实验对照侧,其差异均有统计学意义；W0、W3、E0和E3组的左侧实验组与右侧实验对照组,其差异均无统计学意义。相同修复时间,腕部与肘部相比,W0组和E0组之间；W1组和E1组之间；及W3组和E3组之间的爪内骨骼肌湿重、肌细胞截面积和胶原纤维的增生变化,其差异无统计学意义。
　　 (二)第二部分
　　 1.随失神经时间延长,爪内骨骼肌中促凋亡基因表达蛋白Fas和Caspase-3表达逐渐增高,抑凋亡基因表达蛋白Bcl-2表达降低；恢复神经支配后,Bcl-2表达显著升高,Fas和Caspaso=3表达降低。W0、W1、E0和E1组的实验组与实验对照组比较,实验侧的Fas和Caspase-3表达增高幅度明显低于实验对照侧,差异均有统计学意义;而W3和E3组的实验组与实验对照组的Fas和Caspase-3的表达增高均无明显差异,差异均无统计学意义。W0、W1、W3、E0、E1和E3的实验侧与实验对照侧相比,实验侧的Bcl-2表达量均大于实验对照侧,各组差异均有统计学意义。
　　 2.相同损伤部位,不同修复时间的各实验组大鼠爪内骨骼肌中Fas和Caspase-3表达比较,正常对照组与W0组之间无明显差异,差异无统计学意义,正常对照组和W0组均低于W1和W3组,W1组亦明显低于W3组,且各组差异均有显著性统计学意义；E0、E1、E3组和正常对照组之间的比较结果与W0、W1、W3组和正常对照组之间的比较结果均一致。
　　 3.相同损伤部位,不同修复时间的各实验组大鼠爪内骨骼肌中Bcl-2表达比较,正常对照组低于W0组和W1组,但高于W3组；W0组高于与W1组和W3组；W1组高于W3组,各组差异有显著性统计学意义；E0、E1、E3组和正常对照组之间的比较结果与W0、W1、W3组和正常对照组之间的比较结果均一致。
　　 4.相同修复时间,腕部与肘部相比,W0组和E0组之间；W1组和E1组之间；及W3组和E3组之间的Fas、Caspase-3和Bcl-2表达的变化均一致,无明显差异,差异无统计学意义。
　　 结论:
　　 1.大鼠肘部和腕部的尺神经损伤即刻修复能完全恢复爪内骨骼肌的形态学结构；损伤1个月时修复能部分恢复爪内骨骼肌的形态学结构；损伤3个月时修复对爪内骨骼肌的形态学结构恢复无明显作用。
　　 2.大鼠肘部和腕部的尺神经损伤即刻和1个月修复组的爪内骨骼肌中胶原纤维增多并不明显,而3个月修复组的爪内骨骼肌中胶原纤维显著增生,说明胶原纤维的增多是影响爪内骨骼肌恢复的一个重要影响因素。
　　 3.大鼠肘部和腕部的尺神经损伤即刻修复组的爪内骨骼肌细胞凋亡不明显；损伤1个月修复组的爪内骨骼肌中见较多细胞凋亡；损伤3个月修复组的爪内骨骼肌中见大量细胞凋亡。
　　 4.大鼠腕部与肘部尺神经损伤修复对爪内骨骼肌细胞形态学改变和细胞凋亡改变的影响均无明显差别。