趋化因子CCL2/CCR2在人早孕期绒毛和滋养细胞的功能性表达

摘要

趋化因子是一组小分子量(8-10KD)蛋白质，由70-90个氨基酸组成，结构和功能上具有一定的相关性，均通过与细胞膜表面相应的G蛋白偶联受体结合并发挥各种生物学作用。早孕母-胎界面含有丰富的趋化因子及其受体，存在着复杂交织的调控网络，趋化因子及其受体构成了滋养细胞与蜕膜细胞的相互联系，在母-胎免疫耐受中发挥调节作用。作为最早被鉴定的CC类趋化因子之一，CCL2和受体CCR2结合后，参与炎症、动脉粥样硬化、肿瘤等相关疾病的发生与发展；但关于CCL2在早孕母-胎界面的表达和在母-胎免疫调节中的作用有待研究完善。我们课题组前期研究发现，人早孕蜕膜组织和蜕膜基质细胞均高水平转录和翻译CCL2和CCR2；CCL2/CCR2可能参与蜕膜基质细胞与蜕膜免疫活性细胞间相互对话和交流，并维持母-胎界面Th2型免疫偏移。本课题将进一步完善前期工作，拟研究CCL2/CCR2在人早孕绒毛组织和滋养细胞中的表达和分泌，以解析其在母、胎界面的生物学调节作用。
　　1.趋化因子CCL2/CCR2在早孕绒毛组织的表达
　　本研究首先从转录和翻译水平探讨趋化因子CCL2及其相应配体CCR2在人早孕绒毛组织的表达。采用半定量RT-PCR和免疫组织化学法研究正常早孕人绒毛组织趋化因子CCL2及其相应配体CCR2的表达。结果显示：绒毛组织中等度转录和翻译趋化因子CCL2及其受体CCR2。
　　2.趋化因子CCL2及其受体CCR2在早孕绒毛滋养细胞的功能表达
　　采用免疫细胞化学的方法分析CCL2/CCR2在早孕绒毛滋养细胞和滋养细胞系Bewo细胞的定位表达。结果发现：滋养细胞和Bewo细胞中等度表达CCL2/CCR2。原代培养人滋养细胞48小时，收集培养上清检测CCL2的分泌水平。ELISA分析发现：滋养细胞能持续分泌CCL2，当种植密度为1×106cells/ml时，48小时累积分泌浓度为21.42±2.09ng/ml。应用外源性CCL2、CCR2受体拮抗剂RS102895、抗CCL2单克隆抗体及ERK/MAPK抑制剂U0126单独或共同处理滋养细胞；然后用3H-TdR掺入法分析其对滋养细胞增殖能力的影响。结果发现：外源性CCL2能促进滋养细胞的增殖，抗CCL2单克隆抗体能拮抗内源性CCL2对人滋养细胞的促增殖作用。CCR2受体拮抗剂RS10289及ERK/MAPK抑制剂U0126能拮抗外源性CCL2对人滋养细胞的促增殖作用。
　　综上所述，本研究分析了CCL2/CCR2在滋养细胞的表达；阐明了早孕滋养细胞通过自分泌CCL2促进自身增殖，可能有利于胎盘早期发育和结构稳定。