去整合素金属蛋白酶10在喉癌组织中的表达和临床意义

摘要

目的:
　　喉癌是常见的头颈部恶性肿瘤，近40年来喉癌的发病率有逐渐增多的趋势。喉癌症状主要为声音嘶哑、呼吸困难、反复咳嗽、吞咽困难不适等，其中以声嘶常见，且多为首发症状。喉癌的发生目前尚无确切已知病因，可能是多种因素共同作用导致发病。去整合素金属蛋白酶家族（a disintegrin andmetalloproteinases，ADAMs）是一种近年来新发现的Ⅰ型跨膜蛋白家族，因其包含的两个主要结构基质金属蛋白酶区域与去整合素区域而得名。近几年，金属蛋白酶家族相关的ADAM引起了广泛关注，它的功能不断得到研究。本研究探讨去整合素金属蛋白酶10(ADAM10)在喉癌中的表达及其临床意义。
　　方法:
　　1、收集复旦大学附属眼耳鼻喉科医院头颈外科2011年1月至2011年4月的喉癌全喉切除术或部分喉切除术标本共21例。每例标本均取肿瘤组织及肿瘤周围5cm以上的喉部正常黏膜组织，所有标本离体后均在10分钟内置液氮内保存待提取RNA。组织芯片所用标本收集于复旦大学附属眼耳鼻喉科医院头颈外科2010年2月至2011年4月的喉癌全喉切除术或部分喉切除术标本共62例。每例标本均取肿瘤组织及肿瘤周围5cm以上的喉部正常黏膜组织，标本经10％福尔马林固定，石蜡包埋待制组织芯片。
　　2、采用实时荧光定量RT-PCR(real-time RT-PCR)方法(n=21)与组织芯片(tissue chip)免疫组化方法(n=62)检测ADAM10在喉癌组织中与正常黏膜组织中的表达情况，并分析其差异。
　　结果:
　　real-time RT-PCR结果显示喉癌组织中ADAM10表达显著高于正常组织中的表达(P＜0.001)，其倍数为2.691±1.568。组织芯片结果显示ADAM10在喉癌组织中area％为15.243±7.824，ADAM10在正常组织中area％为1.887±1.918，两者差值为13.356±8.430，喉癌组织中ADAM10的表达量高于正常组织(P＜0.001)。ADAM10的表达与组织学分级相关，与其他临床参数无关。
　　结论:通过实时荧光定量RT-PCR方法与组织芯片免疫组化方法两种实验均显示ADAM10在喉癌组织中有高表达，其表达与肿瘤组织学分级相关。

目录

摘要

英文缩略词表

前言

材料和方法

一、标本收集

二、试剂与耗材

三、实验仪器

四、实验步骤

(一)、总RNA的提取

(二)、RNA逆转录合成cDNA

(三)、Real time PCR步骤

(四)、组织芯片的制作

(五)、免疫组织化学

五、统计学处理

结果

(一)、real-time RT-PCR结果

(1)、ADAM10 mRNA的表达

(2)、real-time RT-PCR检测喉癌组织中ADAM10 mRNA的表达与临床病理特征的关系

(二)、组织芯片结果

(1)、ADAM10蛋白的表达

(2)、组织芯片检测喉癌组织中ADAM10蛋白的表达与临床病理特征的关系

结论

讨论

参考文献

综述 去整合素金属蛋白酶家族(ADAMs)与肿瘤关系的研究进展

攻读硕士期间发表论文与出版专著题录

攻读硕士期间完成未发表论文题录

致谢

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