iNOS抑制剂诱导宫颈癌和卵巢细胞凋亡及调节p53通路的相关研究

摘要

背景:
　　宫颈癌和卵巢癌是常见的妇科肿瘤，严重威胁着女性的健康。目前除了手术治疗，系统性化疗仍是晚期宫颈癌和卵巢癌的标准治疗方案。顺铂(cisplatin，DDP)及铂类衍生物作为一线化疗药物而被广泛应用，但是其毒性反应及耐药性是导致治疗失败的主要障碍。诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxidesynthase，iNOS)和p53的表达在宫颈癌和卵巢癌细胞凋亡的调节和疾病转归中起着关键性的作用。然而在宫颈癌和卵巢癌中抑制iNOS能否影响肿瘤细胞增殖，以及p53通路相关分子调节机制的变化有待进一步研究。
　　目的:
　　本研究主要探讨iNOS抑制剂联合DDP对于宫颈癌和卵巢癌细胞的生长抑制作用，并进一步研究其对p53通路调节的相关分子机制。
　　方法:
　　使用宫颈鳞癌细胞系SiHa细胞和上皮性卵巢癌细胞系OVCAR-3细胞进行实验研究。两种细胞分别用DDP或N-[3-（氨甲基）苄基]乙脒(N-(3-(aminome thyl)benzyl) acetamidine，1400w)处理24-48小时，设对照组、1400W组、DDP组及1400W+DDP组。MTT及流式细胞仪检测细胞存活率。通过检测caspase-3活性来进一步检测细胞凋亡情况。使用Western-blot和real-timePCR对p53、MDM2和DNA依赖蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase，DNA-PK)蛋白以及转录水平表达进行检测。用SPSS17.0软件进行数据统计与分析，使用单因素方差分析，P＜0.05认为有统计学差异。
　　结果:
　　用1400W预处理能明显增强DDP对SiHa细胞的增殖抑制作用，而对OVCAR-3细胞的增殖抑制作用不明显。两种细胞系使用1400W处理后caspase-3活性均明显增强。此外，两种细胞系中1400W+DDP组的p53表达明显低于其他三组。在SiHa细胞中，1400W+DDP组的MDM2表达明显上调，而在OVCAR-3细胞中1400W+DDP组的MDM2表达则明显降低。两种细胞系中1400W+DDP组的DNA-PK表达明显高于DDP组。这三种基因的蛋白表达的差异明显大于mRNA表达差异。
　　结论:
　　1.在SiHa细胞中1400W能够有效增强DDP的细胞毒性作用。而在OVCAR-3细胞中，1400W没有明显增强DDP的细胞毒性作用。
　　2.1400W诱导SiHa和OVCAR-3细胞凋亡机制不同，在SiHa细胞中通过上调MDM2表达来下调p53表达，而在OVCAR-3细胞中p53表达下调不依赖于MDM2。

目录

论文中出现的英文缩略词

摘要

前言

材料与方法

一、材料

二、主要仪器设备

三、图像处理及计算机分析软件

四、实验方法

结果

讨论

小结

附录

参考文献

iNOS，NO与卵巢癌关系的研究进展

致谢

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