非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）病理学评价、无创性诊断指标筛选、发病机制及药物干预研究

摘要

目的: 病理诊断是目前NAFLD诊断的“金标准”，但NAFLD的组织病理学特点仍需明确，NAFLD病理组织学评估系统尚待完善。由于肝活检病理属创伤性检查，筛选NAFLD无创性诊断和/或预测检测指标，是临床NAFLD诊治的迫切需要。NAFLD尤其是NASH的发病机制至今未明，有鉴于此，有效的NASH治疗方法亟待研究。本研究中我们系统分析总结了NAFLD的组织学特点、探讨其组织学评估方法、筛选NAFLD的无创性诊断指标、建立NAFLD实验动物模型，研究NASH的发病机制、并对NASH进行药物性干预研究。 方法: 基于NASH-CRN 2005年推荐的NAFLD组织学评分方案，我们对确诊的130例NAFLD患者的肝穿组织进行病理组织学观察，总结分析NAFLD的病理改变。收集与肝穿活检相配套的NAFLD患者血清，进行血清生化检测，结合组织病理学结果总结分析，筛选与病理改变相关性NAFLD无创性诊断指标。建立高脂诱导性符合代谢综合征范畴的NASH大鼠模型，常规病理、组织化学染色、免疫组织化学染色、分子原位杂交染色等组织原位检测与血清ELISA和生物化学检测相结合，研究脂肪源性激素(瘦素、脂联素)、COX、AT-Ⅱ、TNF-α、TGF-β1等细胞因子或炎性因子在NASH发病过程中的作用。与维生素E相对照，验证壳聚糖治疗NASH的治疗效果及可能的干预途径。 结果: 1．NAFLD病理改变中脂肪变性、肝细胞气球样变、小叶内炎症和纤维化发生普遍，统计学分析结果显示，脂肪变性与小叶内炎症、纤维化及肝细胞气球样变程度间呈正相关关系(r分别=0.587，0.374，0.488，P均<0.01)。微肉芽肿、脂性肉芽肿和凋亡小体随脂肪变性、小叶内炎症、纤维化程度的加重，出现频率呈增加之趋势。巨大线粒体和糖原核则随气球样变程度的加重发生率明显增高。 2．NAFLD患者血清主要异常指标包括，超重或肥胖(按照WHO推荐的BMI标准)，转氨酶升高，甘油三酯水平升高，GGT升高和ALP升高，此外，14.6％的NAFLD患者出现血清磷升高。年龄、BMI、ALT、AST、心率、球蛋白、血清磷和CK-MB、高血压、ALP和LDH等指标与NAFLD的主要组织学病理改变存在不同程度的相关性。甘油三酯、空腹血糖与主要病理组织学改变之间并无明显相关性(P>0.05)。Logistic回归分析结果，仅BMI和AST在回归方程中有显著性差异(P分别<0.01，<0.05)，回归方程为NASH=0.365BMI+0.012AST-9.289。 3．造模4w大鼠肝脏即出现典型的NASH改变，肝脏体重指数增加、大小泡混合性肝细胞脂肪变性、气球样变、小叶内炎症和肝窦壁细胞增生，至造模12w时，肝纤维化已比较明显。模型组大鼠血清TC、LDL水平明显增高，而HDL则有所降低，血清ALT、ALP和GGT升高，白蛋白/球蛋白比值降低，血清胰岛素、瘦素和TNF-α水平明显升高，其中瘦素与TNF-α和胰岛素的水平呈平行关系，且随造模时间的延长和纤维化程度的加重而增高。而脂联素则相反，随造模时间的延长血清脂联素水平呈逐渐降低趋势。模型组及NASH患者肝组织中OB-Rb的蛋白及mRNA表达明显增强。ATR-1蛋白和mRNA表达均明显升高。正常肝组织仅少量表达的COX-1和难以检测到的COX-2，在NASH患者穿刺肝组织以及NASH模型大鼠肝组织内蛋白和mRNA均表达升高，并随病变程度的加重而增强。 4．壳聚糖治疗后，NASH脂肪变性增大的肝脏减小，肝细胞脂肪变性、气球样变、小叶内炎症以及窦周、中央静脉周和汇管区纤维化等NASH病变均有不同程度的改善。血清白蛋白/球蛋白比值恢复正常。血清TC、LDL水平降低，高胰岛素血症也得到了明显改善。在降低瘦素、胰岛素和提高脂联素水平方面优于与维生素E。 结论: 1．基于国际上最新的NASH-CRN方案，基本明确了NAFLD的肝脏病理组织学特点。在NAFLD的病理组织学评估中，除脂肪变性、肝细胞气球样变、小叶内炎症和纤维化外，汇管区炎症也应予以重视。微肉芽肿、脂性肉芽肿和凋亡小体可作为NAFLD病情进展的组织学指标。 2．筛选出了与NAFLD主要病理改变密切相关的无创性指标主要包括年龄、BMI、ALT、AST、心率、球蛋白、血清磷和CK-MB、高血压、ALP和LDH等。初步建立了NASH临床无创性诊断方程，为NASH的无创性诊断提供了潜在应用模型。 3．建立了在肝脏病理、血脂及血生化变化、胰岛素抵抗等NASH关键性指标与NASH患者高度比拟的NASH大鼠试验模型，并从脂肪源性激素、其他细胞因子等角度探索了NASH发生及进展机制。NASH实验大鼠全身和肝脏内可能均出现瘦素抵抗，瘦素在NASH肝组织内炎症和纤维化的发生过程中具有重要作用。研究发现脂联素可能具有拮抗TNF-α、减轻瘦素抵抗和胰岛素抵抗等作用。AT-Ⅱ可能直接作用于肝脏ATR-1，促进NASH肝脂肪变性和肝纤维化的发生。COX-1和COX-2，在NASH的发生过程中可能具有重要意义。 4．在制备NASH模型基础上验证了壳聚糖可减少NASH肝组织内炎症、气球样变、脂肪变性和抗纤维化等治疗作用，其对NASH的治疗疗效优于维生素E。初步发现壳聚糖对NASH的治疗作用除了通过减少肠道胆固醇的吸收、促进脂类的排泌外，还可能通过影响脂肪源性激素或细胞因子的分泌产生而起作用。

目录

论文说明：缩略词表

声明

前言

第一部分NAFLD临床病理学特点及其评估性作用的研究

1材料与方法

2结果

3讨论

第二部分NAFLD无创性诊断指标筛选和临床诊断模型的建立

1材料与方法

2结果

3.讨论

第三部分NASH实验模型的建立及发病机制研究

1材料和方法

2.结果

3讨论

第四部分NASH药物干预研究

2.材料和方法

2.结果

3.讨论

总结

参考文献

致谢

综述：非酒精性脂肪性肝病病理学研究进展

博士期间发表文章

发表论文一

发表论文二