声明
1 文献综述
1.1 苹果砧木种质资源
1.2 接穗与砧木之间的相互作用
1.2.1 砧木对接穗生长的影响
1.2.2 砧木对接穗抗逆性的影响
1.2.3 砧木对接穗生理特性的影响
1.2.4 砧木对接穗的果实的影响
1.3 苹果砧木作用机理研究进展
1.4 植物树体生长素合成与代谢
1.5 本论文研究背景及意义
2 砧木嫁接“烟富3”mRNA组分析
2.1 实验材料
2.2 实验方法
2.2.1 mRNA组测序
2.2.2差异表达基因
2.2.3 GO富集和KEGG途经分析
2.3 结果与分析
2.3.1 mRNA组测序数据质量分析
2.3.2烟富3/八棱海棠、烟富3/M9以及烟富3接穗的基因表达分析
2.3.3烟富3/八棱海棠、烟富3/M9以及烟富3接穗的差异表达分析
2.3.4 GO富集分析
2.3.5 KEGG 富集分析
2.3.6 聚类分析
2.4 讨论
3 生长素测定及激素信号转导途径基因的表达分析
3.1 实验材料
3.1.1 植物材料
3.1.2 实验试剂
3.1.3 仪器设备
3.1.4 引物序列
3.2 实验方法
3.2.1 嫁接树体生长测量
3.2.2 生长素的测定
3.2.3 总RNA的提取及反转录
3.2.4 mRNA实时荧光定量PCR
3.2.5 实验数据分析
3.3 结果与分析
3.3.1 烟富3/八棱海棠、烟富3/M9以及烟富3的枝条生长状况
3.3.2 生长素含量
3.3.3 苹果生长素合成基因YUCCA10a的表达分析
3.3.4 苹果生长素结合酶基因GH3.5的表达分析
3.3.5 苹果生长素轭合物水解酶基因ILR1like5的表达分析
3.3.6 苹果生长素响应因子ARF8基因的表达分析
3.3.7 苹果赤霉素合成酶基因GA20-ox2的表达分析
3.3.8 苹果赤霉素代谢酶基因GA2-ox1的表达分析
3.4 讨论
4 不同砧木YUCCA10a基因CDS序列的克隆与分析
4.1 实验材料
4.1.1 植物材料
4.1.2 实验试剂
4.1.3 实验仪器
4.1.4 引物序列
4.2 实验方法
4.2.1 总RNA的提取及反转录
4.2.2 YUCCA10a基因CDS的克隆
4.2.3目的条带的回收
4.2.4 Taq酶加尾
4.2.5 目的片段连接T-Vector
4.2.6 Inoue 法制备大肠杆菌DH5α超级感受态细胞
4.2.7 连接产物转化大肠杆菌
4.2.8 重组质粒的挑取及扩大培养
4.2.9 提取大肠杆菌质粒
4.2.10 酶切检测
4.2.11 阳性质粒送测序及生物信息学分析
4.3 实验结果与分析
4.3.1 M9矮化砧、八棱海棠砧以及烟富3 的RNA的提取
4.3.2 M9矮化砧、八棱海棠砧以及烟富3 的YUCCA10a基因的克隆
4.3.3 M9矮化砧、八棱海棠砧以及烟富3 的YUCCA10a基因的序列比对
4.3.4 M9矮化砧、八棱海棠砧以及烟富3 的YUCCA10a基因的氨基酸序列同源性及进化性分析
4.3.5 YUCCA10a蛋白质理化性质及结构分析
4.4 讨论
5 砧木嫁接“烟富3”miRNA组分析
5.1 实验材料
5.1.1 植物材料
5.1.2 实验试剂
5.1.3 主要仪器设备
5.1.4 引物序列
5.2 试验方法
5.2.1 嫁接树体生长测量
5.2.2 miRNA组测序
5.2.3 miRNA组数据处理分析
5.2.4差异表达基因
5.2.5 GO富集和KEGG途经分析
5.2.6 miRNA的提取及反转录
5.2.7 miRNA和mRNA实时荧光定量PCR
5.2.8 实验数据分析
5.3 结果与分析
5.3.1烟富3/八棱海棠、烟富3/M9以及烟富3的枝条生长状况
5.3.2 miRNA组测序数据质量分析
5.3.3烟富3/八棱海棠、烟富3/M9以及烟富3的miRNA表达分析
5.3.4烟富3/八棱海棠、烟富3/M9以及烟富3的差异miRNA分析
5.3.5 miRNA靶基因预测
5.3.6 烟富3/八棱海棠、烟富3/M9以及烟富3中的miRNA靶基因GO和KEGG富集分析
5.3.7 烟富3/八棱海棠、烟富3/M9以及烟富3中的参与SAM生长发育相关的miRNA及其靶基因实时定量表达分析
5.4 讨论
6 结论与创新点
参考文献
致谢
附录一 攻读硕士学位论文期间发表的学术论文目录
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