蜂胶水提物对氧化型低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞胆固醇酯聚集及凋亡的影响

摘要

目的： 研究蜂胶水提物(water extract propolis,WEP)对氧化型低密度脂蛋白(oxidized lowdensity lipoprotein,ox-LDL) 诱导的人脐动脉平滑肌细胞(buman umbilical arterysmooth muscle cell，HUASMC)胆固醇酯(cholesteryl ester,CE)聚集及凋亡的影响，探讨WEP 抗动脉粥样硬化作用可能的机制，为蜂胶的进一步开发应用提供依据。 方法： 1.制备 WEP：采用超声波法萃取泰山蜂胶，其水溶性成分用于实验研究。 2.培养 HUASMC 及鉴定：取新鲜脐带脐动脉的中膜平滑肌层，采用贴块法培养HUASMC；经免疫细胞化学方法进行鉴定后用于实验。 3.制备 ox-LDL，测定其氧化修饰程度：以 Cu<'2+>诱导法催化低密度脂蛋白氧化，采用硫代巴比妥酸反应物法测定其中MDA含量，以确定其氧化修饰程度。 4.制备平滑肌源性泡沫细胞模型：分别以 25mg/L、50mg/L、75mg/L 三个浓度ox-LDL 与平滑肌细胞共同培养，于 12h、24h、36h、48h、60h五个时间点检测细胞内总胆固醇(total cholesterol,TC)和游离胆固醇(free cholesterol,FC)含量，以TC 减 FC得出CE的含量，CE/TC 比值>50％作为泡沫细胞的标志，选择 50mg/L OX-LDL 作用48h 作为制备平滑肌源性泡沫细胞模型的适宜条件。 5.实验分组：培养的细胞随机分为五组对照组：正常培养基模型组：50 mg/L ox-LDL 作用48hWEP 干预组：分别以50mg/L、100mg/L、200mg/L 三个浓度的WEP与50mg/Lox-LDL 共同作用 48h： 6.通过油红O染色法对细胞内脂质成分进行染色，观察各组细胞荷脂情况； 7.采用高效液相色谱法测定细胞内TC和FC的含量，从中得出CE的含量，根据细胞蛋白定量。 8.采用流式细胞仪技术 Annexin V/PI 双染法检测细胞凋亡率。 结果： 1.平滑肌源性泡沫细胞模型的制备： 采用 50mg/Lox-LDL 与平滑肌细胞共同培养45h，可使细胞内 CE/TC比值>50％，而转变为泡沫细胞。 2.WEP 对细胞内CE聚集影响的形态学观察： 经油红O染色后显示，模型组与对照组相比细胞内脂滴含量明显增多，50 mg/L、100mg/L、200mg/L 三个浓度WEP干预组细胞内脂滴比模型组少，且随WEP浓度的增高，脂滴的数量有减少的趋势。 3.WEP对细胞内CE含量的影响： 模型组细胞内CE含量高于对照组(P<0.01)，50 mg/L、100mg/L、200mg/L 三个浓度WEP干预组细胞内CE的含量都低于模型组(P<0.01)，且随WEP浓度的增高细胞内CE含量有减少的趋势； 4.WEP 对细胞凋亡的影响： 模型组细胞凋亡率高于对照组(P<0.01)，50 mg/L、100mg/L、200mg/L 三个浓度WEP 干预组细胞凋亡率都低于模型组(P<0.01)，且随WEP浓度的增高细胞凋亡率有降低的趋势。 5.细胞内CE含量与细胞凋亡率之间相关性分析： 细胞内CE含量与细胞凋亡率之间存在正相相关关系，相关系数为0.964，P<0.01。 结论： 1.ox-LDL<'1> 引起体外培养的HUASMC 细胞内CE聚集，而转变为泡沫细胞，同时也能导致HUASMC凋亡率增加； 2.WEP 能够降低 ox-LDL 所致的 HUASMC 细胞内 CE 聚集的程度，从而抑制泡沫细胞的形成。 3.WEP 能够降低ox-LDL 诱导的HUASMC 凋亡，可能与WEP降低细胞内CE含量有关。 4.WEP 抑制 ox-LDL 所致的 HUASMC 细胞内CE聚集并降低其凋亡率，可能是其抗动脉粥样硬化作用的机制之一。

目录

论文说明：符号说明

声明

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

附图

参考文献

综述一 氧化型低密度脂蛋白与动脉粥样硬化

综述二 新生内膜中血管平滑肌细胞来源的研究进展

致谢

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