同型半胱氨酸诱导实验性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及核因子-κB表达的研究

摘要

背景
　　 同型半胱氨酸（HCY）是一种含巯基氨基酸，现有临床资料表明血浆同型半胱氨酸水平升高已被证明是冠心病的独立危险因素，但致病机制尚未完全明了。国内外尚未有HHCY导致冠心病心衰的研究报道，且导致心衰的发生机制尚未明确。核因子-KB（NF-KB）是调节基因转录的重要因子，近来的研究表明NF-KB在心衰的发生发展中起到了重要的作用，是当前研究的热点。本研究通过给予Wistar大鼠低、中、高剂量HCY诱导饮食12周后，建立冠心病心力衰竭模型动物模型，光镜下观察心肌组织形态学变化，用Tunel染色观察心肌细胞凋亡情况。行EMSA测量心肌组织中的NF-KB，观察高同型半胱氨酸血症与心衰的相关性，NF-KB在心衰中的表达。
　　 材料和方法
　　 成年健康Wistar大鼠60只随机分为三组，分别给予低、中、高剂量HCY诱导饮食约12周形成不同水平的HHCY。
　　 1.实验过程中观察大鼠的精神、活动、进食、毛色等情况。
　　 2.心肌组织形态学检查：取左室心肌适量大小，常规固定、包埋、HE染色后行光镜观察。
　　 3.心肌细胞凋亡指数（apoptotoc index，AI）：于左心室心尖部固定部位取适量全层心肌组织，按常规病理组织学方法制备心肌石蜡标本，采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL法）检测凋亡心肌细胞。具体按照原位凋亡检测试剂盒说明书进行操作。细胞核呈棕黄色或者棕褐色颗粒特征，判定为凋亡细胞。光镜下根据凋亡阳性细胞分布情况，每张切片拍摄5个阳性视野，以阳性细胞数所占观察心肌细胞的比例作为凋亡率，即心肌细胞凋亡指数（％）=（凋亡心肌细胞核数/正常心肌细胞核数）×100％。计算心肌细胞凋亡指数，应用SPSS17.0统计学软件分析。
　　 4.从心肌组织中提取核蛋白（具体按照细胞核蛋白提取试剂盒的说明书进行操作）。应用EMSA测量心肌组织NF-κB的活性（具体步骤按照凝胶迁移率分析试剂盒说明进行操作）：①制备聚丙烯酰胺胶和预电泳。②制备结合反应液。③加样后电泳。④电泳转移反应体系到尼龙膜。⑤交联固定DNA。⑥通过化学发光反应检测生物素标记DNA。⑦曝光成像。计算其条带灰度值，应用SPSS17.0统计学软件分析。
　　 结果：
　　 1.12周之后，大鼠心力衰竭模型成功建立。
　　 2.光镜下形态学变化：与对照组相比，模型组心肌损伤程度明显加重。高剂量组破坏程度比低剂量组严重。其中低、中剂量组具有相似的形态学变化。
　　 3.与对照组相比（2.90±0.89％），模型组心肌细胞凋亡指数明显增高（P<0.01），高剂量组心肌细胞凋亡指数（14.17±2.73％）明显高于中剂量组（8.70±1.92％）（P<0.01），低剂量组（7.35±1.26％）和中剂量组（8.70±1.92％）之间无明显差别（P=0.139）。
　　 4.与对照组（条带灰度值为272.64±26.51）相比，模型组NF-κB的活性明显增高（P<0.01）。在模型组中，NF-κB的活性为高剂量组（条带灰度值为780.07±45.34）明显高于中剂量组（条带灰度值为617.61±45.63）（P<0.01），中剂量组（条带灰度值为617.61±45.63）明显高于低剂量组（条带灰度值为485.00±36.07）（P<0.01）。
　　 结论：
　　 1.同型半胱氨酸能诱导大鼠心衰，并且心衰的严重程度与喂养大鼠的同型半胱氨酸的剂量密切相关。
　　 2.心衰组大鼠的NF-κB活性明显增高，心衰的严重程度与NF-κB活性密切相关。NF-κB在心衰的过程中可能发挥了重要的作用，抑制其活性可能成为治疗心衰的一种新途径。

目录

文摘

英文文摘

符号说明

前 言

材料与方法

结 果

讨 论

结 论

附 图

参考文献

综 述

参考文献

致 谢