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皮肤变态反应中P物质的调控机制及药物作用研究

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缩略词表

前 言

第一部分小鼠皮肤三相过敏反应动物模型的建立

1实验材料

2实验方法

2.1小鼠耳皮肤过敏反应的诱导及anti-DNP IgE单克隆抗体浓度的筛选

2.2小鼠皮肤三相过敏模型的建立

2.3组织病理学检测

2.4血清IgE水平的测定

2.5统计分析

3结果

3.1anti-DNP IgE单克隆抗体浓度的筛选

3.2 IgE诱导的小鼠皮肤三相过敏反应模型的建立

3.3小鼠耳皮肤组织病理观察

3.4血清IgE水平测定

4讨论

小结

第二部分P物质在皮肤三相过敏反应中的表达及药物的调控作用

1实验材料

2实验方法

2.1 P物质在小鼠皮肤三相过敏反应中的表达

2.2盐酸西替利嗪对小鼠皮肤三相过敏反应的作用

2.3盐酸西替利嗪对小鼠皮肤三相过敏反应中SP表达的影响

2.4统计分析

3结果

3.1 SP在小鼠耳皮肤中的表达

3.2盐酸西替利嗪对小鼠皮肤三相过敏反应的抑制作用

3.3盐酸西替利嗪对小鼠耳皮肤中SP水平的影响

4讨论

小结

第三部分P物质受体在人表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞的表达及药物作用研究

1实验材料

2实验方法

2.1细胞培养与传代

2.2免疫组织化学法检测NK-1R在HaCaT细胞和真皮成纤维细胞中的表达情况

2.3 RT-PCR

2.4流式细胞术检测不同因素及药物对NK-1R在HaCaT细胞和真皮成纤维细胞中的表达调控

2.5 Western Blotting检测不同因素及药物对NK-1R在HaCaT细胞和真皮成纤维细胞上的表达调控

2.6统计分析

3结果

3.1 HaCaT细胞和真皮成纤维细胞的培养

3.2免疫组织化学检测结果

3.3 RT-PCR结果

3.4 SP、Cet对HaCat细胞和真皮成纤维细胞生存性的影响

3.5流式细胞术检测结果

3.6 Western Blotting检测结果

4讨论

小结

第四部分P物质对皮肤细胞表达细胞因子、趋化因子的影响及药物作用研究

1实验材料

2实验方法

2.1细胞培养

2.2 SP及盐酸西替利嗪对HaCaT细胞和真皮成纤维细胞表达IFN-γ和IL-10的影响

2.3 SP及盐酸西替利嗪对HaCaT细胞和真皮成纤维细胞表达MCP-1的影响

2.4统计分析

3结果

3.1 IFN-γ和IL-10标准曲线的建立

3.2 SP刺激HaCaT细胞和真皮成纤维细胞表达IFN-γ和IL-10的时效关系

3.3 SP刺激HaCaT细胞和真皮成纤维细胞表达IFN-γ和IL-10的量效关系

3.4盐酸西替利嗪对SP诱导HaCaT细胞和真皮成纤维细胞表达IFN-γ和IL-10的影响

3.5盐酸西替利嗪对SP诱导HaCaT细胞和真皮成纤维细胞表达MCP-1的影响

3讨论

小结

第五部分苦参、荆芥对皮肤细胞P物质调控的作用研究

1实验材料

2实验方法

2.1细胞培养

2.2 Mat、Sch对HaCat细胞和真皮成纤维细胞生存性的影响

2.3流式细胞术检测Mat、Sch对NK-1R在HaCaT细胞和真皮成纤维细胞上表达的影响

2.4 Western Blotting检测Mat、Sch对NK-1R在HaCaT细胞和真皮成纤维细胞上表达的影响

2.5 Mat、Sch对SP诱导HaCaT细胞和真皮成纤维细胞表达IFN-γ和IL-10的影响

2.6 Mat、Sch对SP诱导HaCaT细胞和真皮成纤维细胞表达MCP-1的影响

2.7统计分析

3结果

3.1 Mat、Sch对HaCat细胞和真皮成纤维细胞生存性的影响

3.2流式细胞术检测结果

3.3 Western Blotting检测结果

3.4 Mat和Sch对SP诱导HaCaT细胞和真皮成纤维细胞表达IFN-γ和IL-10的影响

3.5 Mat、Sch对SP诱导HaCaT细胞和真皮成纤维细胞表达MCP-1的影响

4讨论

小结

附图

结论

参考文献

致 谢

药物经皮作用的新靶点:神经递质与皮肤免疫系统

博士期间发表论文、申请专利、学术会议及获奖情况

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摘要

皮肤变态反应是发生率较高的过敏反应,当外界致敏原刺激机体时,往往首先在皮肤出现过敏症状,深入探讨皮肤变态反应性疾病的发病机制,发现新药物作用靶点和新治疗药物,具有重要的科学价值。P物质(SubstanceP,SP)是速激肽家族成员,通过与其受体NK-1R结合,参与了皮肤变态反应的发病机制,与皮肤免疫与皮肤炎症密切相关。本研究首先构建新型皮肤三相过敏反应动物模型,从整体水平探讨SP在过敏反应不同阶段的表达行为,并考察抗组胺药盐酸西替利嗪对过敏反应中SP表达的影响。体外培养人表皮角质形成细胞株HaCaT细胞和真皮成纤维细胞,应用免疫组化、RT-PCR方法考察NK-1R在两种细胞上的表达特征。采用流式细胞术和Westernblotting等方法研究SP、LPS、IFN-γ等刺激因素对两种细胞NK-1R的表达调控及盐酸西替利嗪对这一靶点的作用。以SP处理HaCaT细胞和真皮成纤维细胞,考察盐酸西替利嗪对细胞分泌细胞因子IFN-γ、IL-10和趋化因子MCP-1的影响。在本室前期研究基础上筛选出具有抗过敏活性的中药苦参、荆芥,考察其有效部位苦参碱、荆芥挥发油对皮肤变态反应中SP调控作用的影响。

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