人单核细胞（THP-1）cDNA表达文库的构建及趋化因子CXCL14（MIP-2γ/BRAK）受体的寻找

摘要

趋化因子MIP-2γ是一个属于CXC家族的新型趋化因子，趋化因子受体属于七次跨膜的G蛋白耦联受体(GPCR)超家族，而GPCR是当前临床用药最主要的靶点，所以，本研究想通过不同的策略和技术路线来克隆CXCL14的受体。为了克隆CXCL14的受体，我们首先尝试了GSTpull-down的方法，然后尝试了免疫共沉淀方法，随后又采用了已发现的趋化因子受体在克隆时较为常用的一种策略，即通过家族成员在核酸序列上的相似性，用简并寡核苷酸探针从文库中钓取或用简并引物PCR扩增来得到新的基因序列然后再进行实验验证所得到的新序列是否是所要寻找的受体序列。接下来又采用了已发现的趋化因子受体在克隆时最为常用的一种策略——孤儿受体克隆策略(orphanreceptorcloningstrategy)，这些方法均告失败后，最后我们选用了表达克隆(ExpressionCloning)这一策略，构建了CXCL14靶细胞人单核细胞系THP-1的cDNA表达文库，通过一系列的鉴定表明该cDNA文库具有良好的复杂度、较高的库容量以及100﹪的重组率，插入片段大小的范围及平均长度亦与基因平均大小的估算相符，与目前著名公司的商业化cDNA文库的相应指标不相上下，为下一步进行真核表达筛选CXCL14受体奠定了良好的基础，此外还有可能从该文库中克隆到新的全长cDNA。

目录

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缩略词表

第一部分趋化因子CXCL14受体的寻找

一.用GST pull-down及免疫共沉淀(Coimmunoprecipitation)的方法寻找CXCL14受体

二.用简并引物PCR方法寻找CXCL14受体

三.应用孤儿受体克隆策略(orphan receptor clonin strategy)寻找CXCL14受体

参考文献

第二部分人单核细胞(THP-1)cDNA表达文库的构建及鉴定

一.引言

二.主要试剂与器材

三.实验方法及结果

四.讨论

参考文献

总结

新型趋化因子CXCL14（MIP-2γ/BRAK）的功能及其研究进展（文献综述）

致谢