OREXIN受体在睡眠剥夺影响癫痫发作中的作用研究

摘要

目的:
　　 探讨orexin-1受体(OX1R)和orexin-2受体(OX2R)对睡眠剥夺后戊四氮诱发癫痫发作大鼠行为学、海马病理学及海马齿状回颗粒细胞增殖的影响。
　　 方法:
　　 健康雄性wistar大鼠(体重200～250g)48只,随机分为空白对照组(CC):为同等条件下正常饲养的大鼠;戊四氮组(PTZ):给予PTZ50mg/kg腹腔注射;睡眠剥夺加戊四氮组(SD+PTZ):睡眠剥夺采用改良多平台睡眠剥夺方法进行快速眼动睡眠剥夺72小时后给予PTZ50mg/kg腹腔注射;睡眠剥夺加戊四氮和溶剂组(SD+PTZ+DMSO)、睡眠剥夺加戊四氮和OX1R拮抗剂SB334867组(SD+PTZ+SB)和睡眠剥夺加戊四氮和OX2R拮抗剂TCSOX229组(SD+PTZ+TCS):分别于进入睡眠剥夺的同时给予侧脑室注射溶剂DMSO、OX1R拮抗剂SB334867或OX2R拮抗剂TCSOX229,48小时后重复给药一次。首先在动物脑立体定位仪指导下行侧脑室微导管的植入,手术恢复后各组同时进入实验。CC组为同等条件下正常饲养的大鼠,PTZ组给予戊四氮50mg/kg腹腔注射诱发癫痫发作;睡眠剥夺采用改良多平台睡眠剥夺方法进行快速眼动睡眠剥夺,SD+PTZ组睡眠剥夺72小时后给予PTZ(50mg/kg)腹腔注射诱发癫痫发作;SD+PTZ+DMSO、SD+PTZ+SB和SD+PTZ+TCS组大鼠睡眠剥夺的同时在大鼠正常清醒状态下分别给予侧脑室注射溶剂DMSO(5ul)、OXIR拮抗剂SB334867(30nmol/kg)、OX2R拮抗剂TCSOX229(30nmol/kg),48小时后重复给药一次,然后给予50mg/kgPTZ腹腔注射诱发癫痫发作,观察各组大鼠出现癫痫发作的潜伏期、发作持续时间、发作等级评分及死亡百分比等行为学变化。于大鼠癫痫发作后第7天腹腔注射5-溴脱氧尿苷嘧啶(BrdU,100mg/kg),间隔12小时后重复注射一次,用药24小时后灌注取材。HE染色观察海马神经元的变化,免疫荧光观察海马齿状回颗粒细胞增殖的变化。
　　 结果:
　　 1.SD+PTZ组较PTZ组大鼠痫性发作的潜伏期明显缩短,发作级别显著增加,发作持续时间明显延长,死亡率增加,并加重海马CA3区神经元的损害,且海马齿状回亚颗粒细胞层BrdU阳性细胞数显著增多。2.SD+PTZ+DMSO组较SD+PTZ组无明显变化,SD+PTZ+SB及SD+PTZ+TCS组与SD+PTZ组相比,可延长戊四氮诱发痫性发作潜伏期,减轻发作级别,缩短发作持续时间,并降低死亡率,同时减轻睡眠剥夺对癫痫大鼠海马神经元的损害,并减少海马齿状回亚颗粒细胞层BrdU阳性细胞数。3.OX2R拮抗剂的作用比OX1R拮抗剂更强。
　　 结论:
　　 Orexin受体拮抗剂尤其是OX2R拮抗剂可通过抑制海马齿状回颗粒细胞增殖减轻睡眠剥夺对戊四氮诱导癫痫发作的不利影响,即睡眠剥夺可能通过激活orexin系统,通过与其受体尤其是OX2R结合影响癫痫发作。