黏蛋白家族MUC2基因甲基化的检测及对胰腺癌的诊断研究

摘要

目的：评价MUC2基因甲基化对胰腺癌早期诊断意义，并建立一种可行的胰腺癌基因甲基化检测方法。 方法：采用RT-PCR法检测MUC2 mRNA的表达；免疫组化法检测MUC2蛋白的表达情况；甲基化特异性PCR(MSP)+直接测序法检测MUC2基因启动子区发生甲基化的确切位点；采用甲基化限制性酶切(Msp Ⅰ/Hap Ⅱ)+PCR方法检测胰腺癌患者外周血及粪便标本中MUC2甲基化情况。 结果发现：人胰腺癌细胞株ASPC、CFPAC1、SW1990经去甲基化制剂5-Aza处理后MUC2重新表达；同样此3种胰腺癌细胞株经MSP测序明确该基因启动子区5'CpG岛的甲基化位点；在外周血标本组中，40例胰腺癌标本中16例甲基化(40.0％)，15例慢性胰腺炎中未发现甲基化，25例正常对照中1例甲基化(4.0％)。30例胰腺癌患者粪便标本MUC2基因甲基化率为36.7％；8例慢性胰腺炎为0％；20例正常对照者甲基化率为5.0％。10例胰腺癌患者外周血及粪便标本联合检测，4例发生MUC2基因高甲基化，甲基化率为40％；而5例慢性胰腺炎患者及12例正常对照者中，未出现两种标本均发生甲基化者。胰腺癌与慢性胰腺炎、正常对照之间的差异有显著性(P<0.01)。MUC2基因在胰腺癌时普遍存在启动子区高甲基化，并在胰腺癌的发生，发展中起着重要作用。 结论：采用甲基化限制性酶切PCR法对外周血和粪便进行MUC2基因启动子区高甲基化的联合检测可望成为新的胰腺癌诊断方法。

目录

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摘要

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前 言

第一部分MUC2基因在胰腺癌细胞株中mRNA水平上的检测

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分MUC2蛋白在胰腺癌细胞株中的异常表达及与甲基化的关系

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第三部分胰腺癌细胞株标本中MUC2基因启动子区5'CpG岛甲基化及其表达研究

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第四部分MUC2基因甲基化在胰腺癌细胞株、胰腺癌患者外周血及粪便标本中的检测

材料与方法

结果

讨论

参考文献

全文总结

综述一：黏蛋白胰腺癌早期诊断的价值研究进展

综述二：胰腺癌DNA甲基化异化谱研究进展

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致 谢