肾透明细胞癌发生和转移相关的CD99选择性剪接异构体的初步探讨

摘要

目的:寻找人肾透明细胞癌(ccRCC)中发生和转移相关CD99的选择性剪接异构体，探讨CD99选择性剪接异构体表达与ccRCC转移的关系，并探讨其选择性剪接异构体表达与ccRCC间的关系。 方法:前期采用cDNA基因表达谱芯片研究本实验室建立的汉族人能够无限传代的2株在动物模型中证实具有转移潜能的RCC细胞系(RCC05-TXJ、RCC05-ZYJ)基因表达谱，从中选取CD99为兴趣基因。通过选择性剪接数据库(Alternative Splicing Database，ASD)对基因CD99可能存在的选择性剪接异构体进行预测。针对预测的结果，使用PrimerPremier5.0及Oligo6.0软件设计6种预测异构体的RT-PCR引物，采用半定量RT-PCR检测在转移组织、发生及未发生转移的原发癌组织、癌旁组织的各混合样本中检测预测异构体的表达情况。ccRCC转移和原发肿瘤标本来源于2004年1月-2007年9月长海、长征医院泌尿外科肾癌根治术的患者以及长征医院骨科转移癌切除标本，其中包括9例已发生转移的ccRCC原位组织和及其相应转移组织，转移包括骨转移2例，淋巴结转移2例及癌栓5例；21例未发生转移的ccRCC原位组织和及其相应癌旁组织。男性18例，女性12例，平均年龄为52.04岁，最小年龄为40岁，最大为77岁，经病理证实，均为肾透明细胞癌。将PCR产物凝胶回收，与pMD18-T载体连接，经α筛选后转染DH5α感受态细胞，菌液送测序，应用计算机软件进行序列的比对分析。经验证从组织中扩增的产物与生物信息学预测结果一致，确认为新的选择性剪接异构体后，使用同样的引物应用半定量RT-PCR在30例原发肿瘤(包括9例已发生转移的原发癌组织及21例未发生转移的癌组织)、21例癌旁组织及9例转移组织样本中检测CD99Ⅰ、CD99Ⅱ和新型CD99选择性剪接异构体(CD99Ⅲ)的表达水平。 结果:从6种预测异构体中筛选出一种新型异构体(CD99Ⅲ)。该异构体在转移组织中表达(8/9)高于未发生转移的原发癌组织(10/21)(P＜0.05)。CD99Ⅰ在所有样本中均表达，CD99Ⅱ在发生转移的原发癌组织中表达(6/9)远高于未转移的原发癌组织(3/21)(P=0.008)。 结论: CD99Ⅲ为一种新型选择性剪接异构体，且CD99Ⅱ、CD99Ⅲ的表达情况可能与ccRCC的转移进展有关。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：主要英文缩写词表

声明

前 言

第一部分CD99选择性剪接异构体分析预测及验证

一、材料

二、方法

三、结果

四、讨论

参考文献

第二部分ccRCC组织样本中CD99基因异构体的RT-PCR检测

一、材料

二、方法

三、结果

四、讨论

参考文献

总 结

肾细胞癌中基因选择性剪接的研究进展

发表文章及参加科研工作

致 谢