消痰散结方对裸鼠胃癌原位移植模型乙酰肝素酶影响的研究

摘要

胃癌是当今世界范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，居我国消化道恶性肿瘤之首。胃癌的治疗近30年虽然取得了长足的进展，然而国内外胃癌术后的5年生存率仍徘徊20～30％。肿瘤的转移，严重影响了患者术后生存期。魏品康教授根据多年从事的胃癌临床治疗工作经验，认为“痰”是恶性肿瘤发生发展的物质基础；并运用消痰散结方治疗肿瘤，取得了满意的效果。乙酰肝素酶(HPA)是近年来发现在多数肿瘤细胞中表达的一种酶，具有裂解细胞外基质(ECM)和基底膜(BM)，促进微血管生成的作用，在肿瘤的转移过程中起重要的作用。本课题基于HPA对肿瘤转移的影响，建立裸鼠原位移植模型，探讨痰消散结方对肿瘤转移的影响，深入研究消痰散结方抗肿瘤转移的机制。
　　 目的：建立裸鼠人胃腺癌MKN-45原位移植瘤模型，通过应用消痰散结方干预，研究消痰散结方对模型鼠外周血CK-20mRNA及肿瘤组织中MVD和HPA的影响，探讨消痰散结方在抑制肿瘤转移方面可能的机制。
　　 方法：1.利用原位移植的方法，将人胃癌MKN-45瘤株建立在BALB/C裸小鼠胃壁浆膜层下，观察移植瘤后小鼠生存状态。
　　 2.采用完全随机的方法将30只裸鼠模型分为3组，即：生理盐水组、消痰散结方组、5-Fu组，每组10只。于模型建立后第二天后开始给药，生理盐水0.4ml/次，1次/d，连续灌胃6周；消痰散结方浓缩煎剂0.4ml/次，1次/d，连续灌胃6周；0.2ml/次，按60mg/kg腹腔注射，1次/周，连续用药3周。
　　 3.于第6周实验结束时，眼球取血，RT-PCR法测定CK-20mRNA。处死动物，打开腹腔，收集原位瘤组织，称取瘤重，计算抑瘤率，计算肝脏转移灶数目。
　　 4.取瘤组织进行免疫组化染色，计算肿瘤组织中MVD，测定分析原位移植瘤组织HPA的表达强度。
　　 结果：1.成功建立人胃痛MKN-45裸鼠原位移植模型。造模后第二周起，部分裸鼠可在上腹部触及硬肿块，后肿块逐渐增大，质地较硬，较大者中间可有坏死组织。移植瘤原位成功率100％。测定瘤重，计算抑瘤率，消痰散结方、5-Fu组的抑瘤率分别为56.3％、47.2％，统计分析显示，消痰散结方组、5-Fu组与生理盐水组移植瘤质量比较有明显降低，差异有统计学意义(P=0.000,P＜0.05)；同时消痰散结方组较生理盐水组肝脏转移灶有明显减少，差异有统计学意义(P=0.007,P＜0.05)；5-Fu组与生理盐水组差异也有统计学意义(P=0.03,P＜0.05)；而消痰散结方组与5-Fu组之间差异则无统计学意义(P=0.538,P＞0.05)。
　　 2.消痰散结方组与生理盐水组相比，消痰散结方能显著降低外周血中CK20-mRNA的表达(P=0.004，P＜0.01)，差异有统计学意义；而5-Fu组则没有明显的下降(P=0.567，P＞0.05)。
　　 3.结果显示消痰散结方组能显著减少肿瘤组织中MVD(P=0.00，P＜0.05)，差异有统计学意义；而5-Fu组则没有降低作用，(P=0.584，P＞0.05)。消痰散结方组与生理盐水组瘤组织中HPA均有表达，消痰散结方组较生理盐水组能显著降低肿瘤组织HPA的表达明显降低，差异有统计学意义(P=0.01，P＜0.05)；而5-Fu组则无明显的降低的作用(P=0.248，P＞0.05)。
　　 结论：1.利用人胃腺痛MKN-45瘤株成功建立裸鼠原位移植模型，消痰散结方对裸鼠原位移植瘤的生长具有明显的抑制作用，同时能有效减少肝脏转移灶的数目；
　　 2.消痰散结方能有效减少外周血CK20mRNA的表达，明显抑制肿瘤细胞进入外周血，对肿瘤的转移具有重要的抑制作用；
　　 3.消痰散结方能有效降低荷瘤鼠肿瘤组织中MVD；
　　 4.消痰散结方对裸鼠人胃癌原位移植瘤模型的瘤组织中HPA具有明显的抑制用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：中英文对照

声明

前言

第一部分：裸鼠MKN-45胃癌原位移植模型的建立及肝脏转移观察

一、材料与方法

二、结果

第二部分：消痰散结方对人胃癌MKN-45裸鼠原位移植模型外周血CK20mRNA的影响

一、材料与方法

二、结果

第三部分：消痰散结方对裸鼠移植瘤模型乙酰肝素酶影响

一、材料与方法

二、结果

讨论

结论

参考文献

综述肿瘤转移与基底膜的研究

致谢