脂肪来源干细胞辅助下的面部软组织轮廓重塑

摘要

对于为以修复重建为主要宗旨的整形外科及以年轻化为核心的美容医学而言，再生医学一直是备受关注与研究探索的领域。再生医学的发展离不开组织工程技术的支持。组织工程(tissueengineering)是应用生命科学与工程学的原理与技术，在正确认识哺乳动物的正常及病理两种状态下的组织结构与功能关系的基础上，研究、开发用于修复、维护、促进人体各种组织或器官损伤后的功能和形态的生物替代物的一门新兴学科。组织工程研究最重要的基本要素之一，是种子细胞的研究。怎么能获得数量充足、功能良好、来源广泛、取材便捷的种子细胞，成为组织工程学研究的主要对象。组织工程只需要少量的种子细胞，经体外扩增后与生物材料复合，就可以修复较大的组织或器官缺损，重建生理功能，为真正实现无损伤修复组织缺损和真正意义上的形态、结构与功能重建开辟了新的途径。
　　 干细胞(stemcells，SC)因其扩增能力强、具有多向分化能力的特点，理论上可以利用少量干细胞培育出多种组织共存的组织工程产品，而且可以在干细胞水平进行基因修饰，然后在体外扩增，得到同一基因型的大量分化细胞，可以做为良好的种子细胞，逐渐成为组织工程研究的主要对象。目前干细胞按照所处的发育阶段分为：胚胎干细胞(embryonicstemcell，ESC)和成体干细胞(somaticstemcell)。胚胎干细胞具有分化为几乎全部组织和器官的能力，在理论上具有作为种子细胞最理想的效果。但是对于人胚胎干细胞的研究工作却受着各种伦理学方面和法律方面因素的制约，限制了其应用，不能成为良好的种子细胞来源。在成体干细胞的研究方面，脂肪来源干细胞(Adipose-DerivedStemCells，ASCs)因其具有多向分化潜能和自我增殖能力，免疫相容性良好，来源丰富，取材容易等优点，成为组织工程的种子细胞的热点研究对象，具有不可多得的优势和应用前景。
　　 尤其对于整形外科而言，脂肪做为体形雕塑过程中的“废弃物”，如果可以更好的利用，将为整形外科带来更广大的治疗空间。本文主要研究从人脂肪抽吸物中提取原代的ASCs，并将提取的ASCs添加入颗粒脂肪移植物中，形成脂肪-干细胞复合物，进行自体移植，实现面部软组织轮廓的重塑。希望从此研究中，可以寻求一种能将手术创伤减低、术中操作相对容易、术后治疗效果稳定三者更好结合的手术方式。但是ASCs在临床中的疗效仍需进一步观察。
　　 一、人脂肪来源干细胞的分离和培养
　　 目的:从健康女性患者自愿捐献的人脂肪抽吸物中分离培养出具有高成脂能力的人脂肪来源干细胞(ASCs)，并在体外进行成脂诱导，为标准化的脂肪来源干细胞辅助治疗中的ASCs的制备提供指导。
　　 方法:从2例行腹部脂肪抽吸术的健康成年女性患者获取脂肪组织，通过胶原酶消化法，分离培养ASCs，并进行传代培养，观察细胞形态；将第三代的ASCs进行流式鉴定，分析细胞表面标志物特性；将第三代的ASCs进行成脂诱导后，行油红O染色，证实有无脂滴形成。
　　 结果:ASCs贴壁生长，形态为长梭形；细胞表面标志物显示CD105+，CD49D+，CD45-，CD31-，CD34-；ASCs体外成脂诱导后，见大量脂滴形成，油红O染色阳性。
　　 结论:该方法从人脂肪抽吸物中获得的细胞，具有ASCs的形态和表面标志物特点，在体外可以经诱导向脂肪细胞分化。
　　 二、脂肪来源干细胞辅助下的面部凹陷畸形治疗
　　 目的:观察将自体的颗粒脂肪与富集的含有原代脂肪来源干细胞的单个核细胞形成复合物，并将此复合物注射移植于患有面部凹陷畸形患者的面部凹陷部位得到的美容效果。
　　 方法:观察及记录接受脂肪来源干细胞辅助下面部凹陷畸形治疗的16例患者的临床资料，其中男性2人，女性14人，单侧面部凹陷者10人，双侧面部凹陷者6人，共22侧。采用可获取含有原代人脂肪来源干细胞(ASCs)的单个核细胞的分离纯化程序，获取含有原代ASCs的单个核细胞，在体外与颗粒脂肪混合，静置30min，形成脂肪-ASCs复合物，并将此复合物以螺旋可控注射器注射于面部凹陷部位。富集的含有原代ASCs的单个核细胞用细胞计数仪计数，算出颗粒细胞总数，活细胞率，并留样做菌培养，保证手术安全及质量。术前、术后3个月、术后6个月、术后12个月均采用牙模胶覆盖于接受手术治疗的凹陷部位塑性，将所得模型用排水法测得缺损体积，并与术中记录的治疗用量体积进行比对，算出脂肪移植的成活率。B超观察患者术后注射部位的情况，有无结节、包块、囊肿形成。
　　 结果:术后16例患者均获满意疗效，随访12个月，记录的数值用SPSS12.0软件分析，每100ml脂肪可以提取富含原代ASCs的单个核细胞为(2.52±0.50)×108个。配对t检验，术后3月、6月、12月患者移植物体积的P值均>0.05，在α=0.05水平，差异无统计学意义。说明术后3个月开始，脂肪成活已经基本稳定。脂肪移植存活率=(术前体积-术后体积)/术中体积×100％。术后3月、6月、12月脂肪移植存活率分别为(79.64±4.96)％、(82.67±6.12)％、(83.21±5.19)％，总的存活率为(81.84±5.59)％。B超检查未见直径大于2m的结节、包块、囊肿。
　　 结论:本手术方法安全、有效，脂肪移植后成活率高，且效果稳定，有助于改善面部凹陷性畸形造成的软组织轮廓改变。
　　 三、脂肪来源干细胞辅助下的面部年轻化治疗
　　 目的:面部年轻化除皱手术已被广泛应用，其手术效果也被大家认可和接受。可是，对于衰老造成的皮肤质量下降，手术是没有办法纠正的。脂肪来源干细胞(ASCs)的组织修复能力已被广泛研究，结合这样的临床背景，我们将ASCs应用与接受面部年轻化质量的患者，观察ASCs在面部年轻化治疗中的效果。
　　 方法:回顾性研究我院2009年6月至2011年8月间的20例来院接受面部除皱术患者的术前、术后资料，全部为女性。其中接受脂肪来源干细胞辅助下的面部年轻化治疗患者10例，为A组，采用的除皱术式为颞部除皱；单纯接受除皱手术患者10例，为B组，包括全面部除皱术3例，上2/3除皱术3例，额颞部除皱术4例。不论患者是否接受脂肪来源干细胞的辅助治疗，也无论患者除皱手术的范围大小，均对面中部纤维脂肪垫进行连续悬吊处理，以排除手术方式的干扰。设定好具体的量化评分标准，结合VISIA专业皮肤图像分析系统(美国)检测患者术前术后患者面部情况，进行评分比较，并针对术前术后患者的评分进行分析。
　　 结果:术后随访3-15个月。大体评分结果，A组患者的术前评分为10.40±1.43，术后评分为1.90±0.88，B组患者的术前评分为9.70±1.89，术后评分为2.00±1.33，A组患者治疗有效率为(82.45±7.15)％，B组患者的治疗有效率为(80.97±10.83)％。大体评分在A、B两组组间比较的P值>0.05，在α=0.05水平，差异无统计学意义。说明两组患者的治疗效果无明显区别，但是A组患者接受的除皱手术创伤相对较小。VISIA检测在A、B两组进行单独比较，术前、术后纹理、皱纹方面的P值均<0.05，在a=0.05水平，差异有统计学意义。说明A组与B组患者术后在纹理和皱纹方面的改善，均很显著。斑点、毛孔的P值均>0.05，在a=0.05水平，差异没有统计学意义。说明两组患者术后在斑点和毛孔方面的改善，均不显著。VISIA检测在A、B两组进行组间比较，毛孔、斑点改善的P值均<0.05，在a=0.05水平，差异有统计学意义，说明A组在斑点和毛孔方面的改善比B组明显；两组间在纹理、皱纹改善的P值均>0.05，在a=0.05水平，差异没有统计学意义。说明两组间在皱纹和纹理的改善方面没有明显区别。皱纹和纹理改善结果与大体评分结论基本一致。
　　 结论:脂肪来源干细胞辅助下的面部年轻化治疗能在减少除皱手术切口的同时，达到与除皱手术基本相同的手术效果，且术后患者在皮肤质量上的改善优于单纯接受除皱手术的患者。