反义链长链非编码RNA(PCNA-AS1)在原发性肝癌中的作用及分子机制研究

摘要

目的:原发性肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是我国发病率最高的恶性肿瘤之一，而目前对这一恶性程度极高的肿瘤发生发展的分子机制仍需深入的研究，反义链长链非编码RNA（antisense long noncoding RNA，antisense lncRNA）是一类染色体位置、序列结构比较特殊的长链非编码RNA(long noncoding RNA, lncRNA)，在细胞内广泛存在，并且在以往的研究中已经证实其与肿瘤有着密切的关系，截至目前，反义链lncRNA在原发性肝癌发生发展过程中的作用缺乏系统报道，亟待人们研究。
　　 方法:本课题应用较大规模的基因芯片检测原发性肝癌癌组织与癌旁组织中lncRNA以及mRNA的表达，筛选出在癌组织与癌旁组织中差异表达的反义链lncRNA，应用生物信息学方法，系统地分析差异表达的反义链lncRNA与正义链基因表达量相关性，分析与反义链lncRNA表达量密切相关的分子或者信号通路，并对所筛选的反义lncRNA发挥作用的分子机制进行预测，进而筛选与原发性肝癌发生发展密切相关的反义链lncRNA，我们发现一个位于肿瘤相关基因PCNA反义链的lncRNA(PCNA-AS1)差异表达，并通过慢病毒方法进行过表达来研究其功能以及其对正义链基因PCNA的调控，通过生物信息学预测和核酸酶保护实验等探讨其对PCNA的调控机制。
　　 结果:我们发现肝癌发生发展中存在一组差异表达的反义链lncRNA并且这组lncRNA能很好的区分癌组织与癌旁组织，其中位于肿瘤相关基因反义链的lncRNA仍可以很好的区分癌组织与癌旁组织，对与这组反义链lncRNA相关的编码基因进行功能富集分析发现这些基因参与多种肿瘤相关信号通路，提示这组反义链lncRNA在肝癌发生发展中发挥重要作用;部分反义链lncRNA与正义链基因表达量相关性与拷贝数变异无关，提示反义链lncRNA对正义链基因可能有调控作用;其中一个反义链lncRNA PCNA-AS1与正义链基因PCNA的表达在基因芯片及肝癌组织样本中表达量呈正相关，且PCNA-AS1的表达与肿瘤数目相关(P=0.022);过表达PCNA-AS1可促进体内外肿瘤细胞增殖，并且可上调PCNA的表达;RNA二级结构预测发现PCNA-AS1与PCNA有较强的结合能力，通过体内外实验证实PCNA-AS1与PCNA mRNA相互结合，并且这种结合可提高PCNA mRNA的稳定性，进而上调PCNA mRNA及蛋白水平，提示PCNA-AS1促进了体内外肝癌细胞增殖可能是通过调控正义链基因PCNA mRNA稳定性实现的。
　　 结论:在肝癌发生发展中反义链lncRNA发挥重要作用，并且部分可能是通过影响正义链基因表达而影响肝癌的生物学特点;反义链lncRNA PCNA-AS1可能通过稳定PCNA mRNA增加PCNA表达量，进而促进肿瘤细胞的增殖。

目录

声明

摘要

缩略词表

正文

一、前言

二、材料与方法

三、实验结果

四、结论

五、讨论

附录

参考文献

综述

论文发表和科研工作情况

致谢