现代分析技术应用于中药复方三妙丸的物质基础和药代动力学研究

摘要

方剂是中医治病的主要手段之一，中医药以其独特的整体观、辨证论治的优势越来越受到重视。但由于中药效应组分复杂多样，在复方中的作用、在体内的代谢以及组分间复杂的相互作用关系尚未完全阐明，这成为制约中药发展的主要瓶颈。
　　 近年来，大量先进的分析技术已应用于中药研究领域，国内外学者对中药物质基础研究和质量控制方法提出了许多新思路。本论文以三妙丸为研究对象，运用多种现代联用分析技术，从体外、体内两个方面，对三妙丸的化学成分进行分析，建立了一系列三妙丸化学物质鉴别以及含量测定的方法，并对相关成分进行药代动力学研究，为其配伍规律的深入研究和临床合理用药提供科学依据。
　　 首先采用HPLC-TOF/MS技术对三妙丸中的化学成分进行分离鉴别和结构解析，并进一步分析了三妙丸给药后大鼠血浆中的吸收成分。利用飞行时间质谱的精确分子量测定结合数据库匹配技术和TOF/MS可以通过调节碎片电压获得丰富碎片离子信息的特性，共鉴别出23种化合物。在此基础上，我们进一步对三妙丸的入血成分进行筛选和鉴别，在大鼠血浆中检测到12种吸收入血成分。对三妙丸的挥发油成分采用GC-MS进行了定性鉴别。借助计算机检索与相应的化学成分数据库自动匹配功能，共成功鉴别出三妙丸21种挥发性成分。本研究为三妙丸的质量控制和代谢研究奠定了基础。
　　 在体外及体内入血成分鉴别结果的基础上，建立了RP-HPLC法同时测定三妙丸中黄柏碱、木兰花碱、巴马汀、小檗碱、黄柏酮及黄柏内酯6种成分的含量，色谱柱:CAPCELL PAK C18柱(3.0mm×100mm，3μm)，流动相:A相为乙腈;B相为0.1％磷酸（三乙胺调pH=3.0），梯度洗脱;对该方法进行了系统的方法学验证，验证结果表明6种成分的线性范围分别为黄柏碱5.02～50.2μg·mL-1，木兰花碱14.88～148.8μg·mL-1，盐酸巴马汀5.145～51.45μg·mL-1，盐酸小檗碱15.11～151.1μg·mL-1，黄柏内酯15.03～150.3μg·mL-1，黄柏酮5.06～50.6μg·mL-1;线性关系良好;6种成分的日内精密度RSD值均小于1.5％，日间精密度RSD值均小于2.5％;加样回收率、重复性和稳定性的考察结果均符合分析要求。该方法准确、灵敏、稳定性好，可用于三妙丸的常规质量控制。
　　 为进一步研究三妙丸中主要成分在体内的吸收、代谢过程，本文建立了LC-MS法测定大鼠血浆中木兰花碱、巴马汀、小檗碱的血药浓度。样品前处理采用蛋白沉淀法;色谱条件采用乙腈-水（0.1％甲酸，10mmol乙酸铵）体系，梯度洗脱;质谱条件选择ESI源正离子模式，选择离子模式(SIM)监测三种生物碱的[M]+及内标蝙蝠葛碱的[M+H]+。方法学验证结果表明，血浆中内源性物质均不干扰样品峰的测定，木兰花碱、巴马汀、小檗碱的线性范围分别为2.032 ng·mL-1-203.2 ng·mL-1，1.029ng.mL-1-102.9 ng.mL-1，1.008 ng·mL-1-100.8 ng·mL-1，线性关系良好;低中高三个浓度的日内和日间精密度RSD＜10.0％，准确度在91.8％-105.9％之间。提取回收率、基质效应和稳定性的考察结果均符合分析要求。应用所建立的LC-MS法测定了大鼠灌胃三妙丸后三种成分的血药浓度，获得相应的药代动力学特征，为三妙丸的合理用药提供了依据，同时也为中药复方的药代动力学研究提供了可借鉴的方法。

目录

声明

摘要

前言

第一章 三妙丸中多种化学成分的鉴别研究

第一节 三妙丸化学成分的HPLC-TOF／MS定性鉴别

一、仪器与试剂

二、方法与结果

三、三妙丸中化学成分定性分析结果

四、讨论

五、小结

第二节 三妙丸挥发性成分的GC-MS分析

一、仪器与试剂

二、方法与结果

三、三妙丸中挥发油的GC-MS分析结果

四、讨论

五、小结

第二章 三妙丸大鼠入血成分的HPLC-TOF／MS快速鉴别

一、仪器与试药

二、实验方法

三、HPLC-TOF／MS对大鼠灌胃给药后入血成分的快速鉴别

四、讨论

五、小结

第三章 HPLC法同时测定三妙丸中6个成分的含量

一、仪器和试药

二、方法与结果

三、讨论

四、小结

第四章 三妙丸提取物中木兰花碱、巴马汀、小檗碱的多成分药代动力学研究

一、仪器与试药

二、灌胃药材提取物的制备

三、动物实验

四、血浆样品的HPLC-MS分析

(一)标准溶液的配制

(二)血浆样品的预处理方法

(三)分析条件

五、血浆样品分析方法验证

六、数据处理

七、药动学结果

八、讨论

九、小结

参考文献

综述

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致谢