红景天苷预处理对刀豆蛋白A诱导小鼠肝损伤的作用及机制探讨

摘要

[研究目的] 本实验通过检测小鼠外周血细胞因子表达水平的变化及肝组织病理学变化等方法，旨在研究红景天苷预处理对刀豆蛋白A诱导的肝损伤小鼠是否具有保护作用，并探讨其在刀豆蛋白A诱导肝损伤模型中可能的免疫机制。 [研究方法] 1.将C57BL/6雄性小鼠随机分为3组:生理盐水(normal saline， NS)组:经小鼠尾静脉注射生理盐水100μl，1h后再次经尾静脉注射生理盐水100μl。刀豆蛋白A(concanavaline A，ConA)组:经小鼠尾静脉注射生理盐水100μl，1h后经尾静脉注射刀豆蛋白A(20mg/kg，100μl)。红景天苷(salidroside，SAL)组:经小鼠尾静脉注射红景天苷(50mg/kg，100μl)，1h后经尾静脉注射刀豆蛋白A(20mg/kg，100μl)。 2.各组小鼠每组各10只，尾静脉最后一次注射12h时，在七氟烷麻醉下，经心脏采血，采用全自动生化分析仪技术检测小鼠血浆中谷丙转氨酶(alanineaminotransferase，ALT)和谷草转氨酶(aspartate aminotransferase，AST)水平。安尔碘消毒皮肤，经腹中线开腹，取出小鼠肝脏组织，行HE染色，在光学显微镜下观察小鼠肝脏损伤程度。 3.各组小鼠每组各10只，尾静脉最后一次注射12h时，在七氟烷麻醉下，经心脏采血，置入抗凝管冷存;取出肝组织及脾脏进行研磨，采用流式细胞术检测小鼠外周血、肝脏及脾脏研磨液中CD4+T和CD8+T淋巴细胞计数。 4.各组小鼠每组各10只，尾静脉最后一次注射12h时，在七氟烷麻醉下，经心脏采血，采用血浆酶联免疫吸附法检测小鼠外周血TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-10浓度;取出肝脏组织采用实时荧光定量PCR法检测肝脏组织中TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-10以及CXCL-10 mRNA表达水平。 5.各组小鼠每组各10只，尾静脉最后一次注射12h时，在七氟烷麻醉下，取出肝脏组织，采用Western蛋白印迹方法检测NF-κB p65与IκBα的蛋白表达水平。 [结果] 1.ConA组外周血中ALT、AST表达水平均显著高于NS组(P均小于0.01）;SAL组外周血中ALT、AST表达水平均显著低于Con A组(P均小于0.01）;SAL组与NS组之间外周血中ALT、AST表达水平均无统计学差异(P均大于0.05)。小鼠肝脏组织病理切片在光学显微镜下显示，NS组小鼠肝细胞形态无异常，肝小叶结构完整;ConA组小鼠肝组织大片及亚大片坏死，细胞坏死、肿胀严重;SAL组肝脏病变程度较刀豆蛋白A对照组显著减轻。各组小鼠肝脏病理切片光学显微镜下评分统计分析提示，Con A组评分显著高于NS组(P＜0.01);SAL组评分明显低于Con A组(P＜0.01);SAL组评分显著高于NS组(P＜0.01)。 2.采用流式细胞术检测小鼠外周血、肝脏及脾脏组织结果显示，ConA组小鼠外周血中CD4+T及CD8+T淋巴淋巴细胞计数均显著低于NS组（P均小于0.01），肝脏组织中CD4+T及CD8+T淋巴淋巴细胞计数均显著高于NS组(P均小于0.01)，脾脏组织中CD4+T及CD8+T淋巴淋巴细胞计数均显著低于NS组（P均小于0.01）;SAL组小鼠外周血中CD4+T及CD8+T淋巴淋巴细胞计数与ConA组均无统计学差异(P均大于0.05)，肝脏组织内CD4+T及CD8+T淋巴细胞计数均显著低于ConA组(P均小于0.01），脾脏组织中CD4+T及CD8+T淋巴计数均明显高于ConA组(P均小于0.01); SAL组小鼠外周血中CD4+T及CD8+T淋巴淋巴细胞计数均显著低于NS组(P均小于0.01），肝脏组织内CD4+T淋巴细胞计数显著高于NS组(P＜0.01)而CD8+T淋巴细胞计数与NS组之间无统计学差异(P＞0.05），脾脏组织中CD4+T及CD8+T淋巴计数均明显低于NS组(P均小于0.05)。 3.采用酶联免疫吸附法检测小鼠外周血结果显示，Con A组中TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-10水平显著高于NS组(P均小于0.01); SAL组中上述指标均显著低于ConA组（P均小于0.01）。采用RT-PCR法检测小鼠肝脏组织结果显示，ConA组中TNF-α、IFN-γ、IL-6、CXCL-10 mRNA表达水平显著高于NS组（P均小于0.01），IL-10 mRNA显著低于NS组（P＜0.01）;SAL组中TNF-α、IFN-γ、 IL-6、CXCL-10mRNA显著低于Con A组(P均小于0.01)，IL-10 mRNA显著高于Con A组(P＜0.05)。 4.采用western蛋白印迹法检测小鼠肝组织结果显示，SAL组小鼠肝脏组织中NF-κB p65及IκBα蛋白表达明显低于ConA组。 [结论] 红景天苷预处理可显著减轻刀豆蛋白A诱导的小鼠肝损伤，其机制可能与红景天苷抑制趋化因子CXCL-10 mRNA表达减少CXCL-10的分泌，降低CD4+T及CD8+T淋巴细胞在肝脏组织浸润，以及抑制NF-κB p65和IκBα表达水平，调控TNF-α、IFN-γ、 IL-6及IL-10等炎症因子分泌有关。

目录

声明

摘要

缩略词中英文对照表

前言

第一部分 红景天苷预处理对刀豆蛋白A诱导小鼠肝损伤的影响

材料与方法

结果

讨论

第二部分 红景天苷预处理改善刀豆蛋白A诱导小鼠肝损伤的免疫机制研究

材料与方法

结果

讨论

全文小结

参考文献

文献综述 刀豆蛋白A在自身免疫性肝损伤模型中的免疫机制

在读期间发表论文和参加科研工作情况

致谢