κ阿片受体对复苏后大鼠心功能障碍保护作用的信号通路机制

摘要

研究目的:观察κ阿片受体(KOR)调节复苏后心功能障碍的信号通路，探讨κ阿片受体对复苏后心功能障碍保护作用的机制，为κ阿片受体用于改善复苏后心功能障碍提供理论依据。
　　研究方法:健康雄性SD大鼠(300-350g)随机分为对照组(C)、激动剂组(U)、抑制剂组(G)，每组随机分为5个亚组（分别为1h组、2h组、6h组、12h组、24h组），每个亚组8只，常规称重、麻醉、固定、手术区域备皮、气管插管、股动静脉置管、股动脉置管接压力换能器，四肢接肢体导联连至多导生物分析系统(bioMPA2000)，抽取血气分析后适应性机械通气20分钟（吸入氧浓度21％，呼吸频率70次/分，潮气量8ml/kg，吸呼比1∶1）。使用气管插管封堵法窒息，至收缩压降至25mmHg以下（判断心搏停止）并持续6min后开始机械通气及胸外心脏按压（按压频率200次/分按压幅度为1/3胸廓前后径），在开始心肺复苏前1分钟对照组、激动剂组以及抑制剂组分别通过股静脉置管给予生理盐水(1.0ml/kg)、U50488H(1.5mg/kg)、GNTI(0.3mg/kg)，复苏成功后持续记录心率、收缩压、舒张压、平均动脉压等指标，并分别在复苏后1h、2h、6h、12h、24h，5个时间点处死SD大鼠，取心室肌组织用RT-PCT法测定GRK3和κ阿片受体的mRNA表达水平，Western blot法测定κ阿片受体总蛋白、磷酸化κ阿片受体蛋白、GRK3总蛋白、ERK1/2和磷酸化ERK1/2蛋白以及AKT和磷酸化AKT蛋白表达水平。
　　结果:
　　1.复苏前各组的体重、麻药使用量、心率、血压、动脉氧分压、动脉二氧化碳分压、动脉碳酸氢根、乳酸等均无统计学差异。
　　2.复苏后激动剂组各时间点的心率、收缩压、舒张压以及平均动脉压与对照组比较均无统计学差异。复苏后1.5h抑制剂组的心率高于对照组，复苏后1h、1.5h、2h抑制剂组收缩压、舒张压、平均动脉压均高于对照组。
　　3.复苏后κ阿片受体总蛋白的变化趋势为复苏成功后κ阿片受体逐渐升高，至复苏后6小时其表达量达到高峰，之后逐渐降低。激动剂组和抑制剂组变化趋势均与对照组相似，复苏后各时间点激动剂组以及抑制剂组分别与对照组进行比较，均无统计学差异。在mRNA水平复苏后各时间点κ阿片受体mRNA表达水平较基线水平有明显升高，复苏后激动剂组表达量高于对照组，抑制剂组表达水平低于对照组。复苏后磷酸化κ阿片受体开始升高，复苏后2小时达到峰值之后持续下降至复苏后12小时，在复苏后24小时再次达到高峰。激动剂组变化趋势同对照组，抑制剂组一直处于低水平。复苏后两小时以后每个时间点的激动剂组表达量高于对照组，抑制剂组表达量低于对照组。
　　4.复苏后GRK3的总蛋白表达一过性降低至复苏后2小时达到低谷之后逐渐上升，激动剂组变化趋势同对照组，抑制剂组的表达一直处于低水平。复苏后5个时间点激动剂组总体表达量高于对照组。复苏后各时间点抑制剂组表达量明显低于对照组。复苏后GRK3 mRNA的表达呈缓慢上升至复苏后6h达到峰值，之后缓慢下降。激动剂组和对照组相比较在各时间点均无统计学差异。复苏后6h以及复苏后24h两个时间点抑制剂组明显低于对照组。复苏后各时间点的κ阿片受体和GRK3 mRNA表达量分别配对后行相关性分析，两者具呈线性相关。
　　5.复苏后磷酸化ERK开始升高，复苏后2小时达到峰值之后逐渐下降低至复苏后12小时，在复苏后24小时再次达到高峰。激动剂组变化趋势同对照组，抑制剂组一直处于低水平。复苏后各时间点的激动剂组表达水平高于对照组，抑制剂组表达水平低于对照组。复苏后磷酸化AKT逐渐升高，复苏后12小时达到峰值之后逐渐下降低。激动剂组至复苏后6小时达到高峰，之后逐渐下降，抑制剂组一直处于低水平。复苏后各时间点的激动剂组磷酸化AKT表达量均高于对照组，复苏后2小时至24h各时间点的抑制剂组表达量明显低于对照组。
　　结论:
　　1.窒息致心搏骤停-心肺复苏心肌组织中κ阿片受体被激活，其变化趋势为复苏后2h磷酸化κ阿片受体表达量达到峰值，此后有所下降，至24h再次升高。
　　2.复苏后心肌组织κ阿片受体mRNA和蛋白表达水平明显升高，且与GRK3间有相关性。
　　3.激动κ阿片受体后ERK1/2和PI3K/AKT通路被激活，κ阿片受体对复苏后心功能障碍的保护作用可能通过以上两条信号通路实现的。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

材料与方法

一、实验材料

二、实验方法

实验结果

一、一般情况

二、复苏前血气分析

三、血流动力学参数

四、复苏后各时间点KOR、GRK3在mRNA水平的表达

五、心肺复苏后各时间点KOR、磷酸化KOR、GRK3及ERK1／2和PI3K／AKT信号通路关键蛋白的表达

讨论

结论

参考文献

文献综述 阿片类物质对心脏作用的研究进展

攻读学位期间发表的论文

致谢