论文说明
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摘要
第一章 文献综述
1.1 戊型肝炎病毒研究进展
1.1.1 戊型肝炎病毒危害
1.1.2 HEV发现及分类
1.1.3 HEV进化史
1.1.4 HEV基因组结构
1.1.5 衣壳蛋白自组装
1.1.6 中和表位和疫苗
1.1.7 戊型肝炎流行情况
1.1.8 HEV的物种间传播
1.1.9 HEV传播途径
1.1.10 HEV实验室诊断
1.2 诺如病毒研究进展
1.2.1 诺如病毒发现及危害
1.2.2 诺如病毒基因组
1.2.3 诺如病毒感染及致病
1.2.4 病毒生命周期
1.2.5 病毒结构蛋白
1.2.6 VPg蛋白
1.2.7 诺如病毒、宿主与微生物之问的互作
1.2.8 鼠诺如病毒
第二章 山东地区猪戊型肝炎病毒基因组序列特征分析及感染率调查
2.1 研究背景与意义
2.2 实验材料
2.2.2 血清样品
2.3 实验仪器与试剂
2.3.1 实验试剂
2.3.2 主要仪器
2.4 方法
2.4.1 检测胆汁或血清样品中的猪HEV orf2基因
2.4.2 猪HEV毒株完整基因组序列的扩增
2.4.3 测序及进化分析
2.4.4 提交HEV序列到GenBank
2.4.5 猪HEV ORF2重组蛋白的制备
2.4.6 间接ELISA
2.4.7 统计分析
2.5 实验结果
2.5.1 猪胆汁样品中猪HEV检测结果
2.5.2 猪HEV orf2基因序列比对结果
2.5.3 山东株猪HEV∶CHN-SD-sHEV
2.5.4 重组蛋白表达纯化
2.5.5 确定i-ELISA cut-off值
2.5.6 山东地区猪HEV感染率研究
2.6 讨论
2.7 小结
第三章 两个戊型肝炎病毒共有抗原表位的鉴定
3.1 研究背景及意义
3.2 实验材料
3.2.1 血清样品
3.2.2 多肽
3.2.3 单克隆抗体
3.2.4 不同种属HEV毒株
3.3 实验仪器与试剂
3.3.1 实验试剂
3.3.2 主要仪器
3.4 实验方法
3.4.1 噬菌体展示技术筛选抗原表位
3.4.2 合成多肽
3.4.3 制备重组蛋白
3.4.4 间接ELISA
3.4.5 Western Blot
3.4.7 软件计算分析
3.4.8 免疫保护性分析
3.5 实验结果
3.5.1 两株禽单克隆抗体与猪HEV衣壳蛋白具有交叉反应性
3.5.2 抗原表位噬菌体生物淘选结果
3.5.3 抗原表位关键氨基酸的鉴定
3.5.4 共有抗原表位与抗禽、抗猪或抗人HEV阳性血清交叉反应
3.5.5 抗原表位保守性
3.5.6 抗原表位空间定位
3.5.7 抗原表位3E8和1B5对鸡没有保护性
3.6 讨论
3.7 小结
第四章 宿主细胞与诺如病毒VPg互作蛋白的鉴定
4.1 背景与意义
4.2 实验目的与研究路线
4.3 实验试剂与仪器
4.3.1 实验试剂
4.3.2 实验器材
4.4 实验方法
4.4.2 构建GFP重组质粒
4.4.3 细胞同位素标记与培养
4.4.4 细胞转染
4.4.5 制备IP样品
4.4.6 免疫共沉淀
4.4.7 质谱检测
4.4.8 数据分析
4.4.9 验证IP结果
4.4.11 qPCR检测病毒RNA含量
4.5 实验结果
4.5.1 HuNoV和MNV VPg基因同源性分析并构建GFP标签重组质粒
4.5.2 GFP亲和纯化系统验证
4.5.3 质谱数据评估
4.5.4 筛选质谱获得与VPg相互作用蛋白
4.5.5 互作蛋白网络分析
4.5.6 宿主细胞中与VPg互作蛋白分析
4.5.7 验证互作靶蛋白
4.5.8 YBX1和G3BP1功能探究
4.6 讨论
4.7 本章小结
第五章 鼠诺如病毒VP2蛋白与宿主细胞互作蛋白的鉴定
5.1 研究背景与意义
5.2 研究目的与研究路线
5.2.1 研究目的
5.2.2 研究路线
5.3 实验试剂与仪器
5.3.1 实验试剂
5.3.2 实验器材
5.4 实验方法
5.4.1 细胞培养
5.4.2 同位素标记BV2细胞
5.4.6 纯化浓缩病毒
5.4.7 病毒感染细胞
5.4.8 FLAG亲和纯化
5.4.9 质谱检测
5.4.10 数据分析
5.4.1 1 制备转染VPg-linked RNA
5.4.12 免疫荧光共定位
5.5 实验结果
5.5.1 获得高滴度重组病毒
5.5.2 FLAG亲和纯化效果验证
5.5.3 质谱检测结果评估
5.5.4 设定质谱数据阳性判定值
5.5.5 宿主细胞中与VP2互作的靶蛋白
5.5.6 验证互作靶蛋白
5.5.7 免疫荧光共定位分析VP2在病毒代谢中细胞定位
5.5.8 宿主细胞中与Ns4或VP2互作靶蛋白分析
5.5.9 宿主细胞中与Ns1/2或VP2互作靶蛋白分析
5.6 讨论
5.7 本章小结
全文总结
研究创新点
参考文献
致谢
作者简介