山羊与犬半月板脱细胞基质支架的制备及细胞亲和性研究

摘要

半月板是膝关节中的基础纤维软骨组织。损伤半月板会损害正常膝关节功能和易使患者患骨关节炎。随着对半月板临床功能的深入研究，保留半月板显得尤为重要。在半月板损伤重建研究中，选择理想的半月板替代材料对损伤半月板的修复具有重要作用。 组织工程半月板采用不引起排斥反应和可进行生物降解的支架材料负载种子细胞，在一定刺激因素等作用下重新形成有功能的半月板组织。这意味着支架需要具有良好生物相容性，低免疫原性的特点。半月板脱细胞支架为上述特点提供了可能性。 兔、猪和人类的半月板脱细胞支架的制备已有研究报道，但山羊和犬的半月板脱细胞支架的制备及细胞亲和性研究鲜有报道。本试验采用三次高低渗冻融循环、含1%（w/w）SDS离子洗涤剂脱除细胞、DNA酶清除核酸物质、超声波清洗细胞残留等步骤制备山羊和犬的半月板脱细胞支架，然后通过组织学染色、DNA含量检测、力学测试、电镜观察和活/死细胞染色等方法检测两种支架的性能及细胞亲和性。 1、半月板脱细胞支架的性能 HE染色、天狼猩红染色和阿尔新蓝染色三种组织学染色显示山羊和犬半月板脱细胞支架均未见明显细胞。DNA含量测定结果显示山羊半月板脱细胞后DNA含量减少了85.0%，犬半月板脱细胞后DNA含量减少了90.9%。组织学和电镜观察显示山羊和犬半月板的胶原纤维均呈线性沿圆周方向排列，鲜有径向排列。力学性能检测显示，山羊和犬半月板脱细胞后压缩模量分别降低了19.1%和23.7%。 2、脱细胞支架的细胞亲和性 细胞毒性检测显示山羊和犬半月板脱细胞支架均对犬BMSCs没有细胞毒性。山羊和犬半月板脱细胞支架分别接种犬BMSCs 2天培养后，电镜下可以清楚的观察到犬BMSCs在两种支架上粘附生长，细胞形态伸展；活/死细胞染色荧光显微镜下可见，犬BMSCs在两种支架凹凸不平的表面生长良好，鲜有死细胞存在。 总之，我们成功的制备了山羊半月板脱细胞支架和犬半月板脱细胞支架，两种支架均达到较好的细胞脱除程度，拥有一定的力学性能和良好的细胞亲和性。

目录

声明

第一章 半月板脱细胞支架的制备与细胞相容性的研究进展

1.1 半月板的概况

1.1.2.1 半月板生化成分

1.1.2.2 半月板细胞成分

1.2 半月板支架材料的分类

1.3 半月板脱细胞支架的制备

1.4 支架的细胞亲和性

第二章 山羊与犬半月板脱细胞支架的制备及性能检测

2.1 材料

2.2 方法

2.3 结果

2.4 讨论

2.5 小结

第三章 山羊与犬半月板脱细胞支架的细胞亲和性检测

3.1 材料

3.2 方法

3.3 结果

3.4 讨论

3.5 小结

结论

参考文献

致谢

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