比率荧光系统检测[Ca]中的影响因素分析及应用

摘要

钙离子(Ca<'2+>)是细胞中非常重要的第二信使，它可以介导信号的传递，在细胞生命活动中具有非常重要的作用。许多生命现象如细胞增殖、分化、凋亡等都与之相关。各种检测细胞内Ca<'2+>浓度([Ca<'2+>]<,i>)的方法与技术也随之发展起来。比率荧光测量方法就是目前最先进的[Ca<'2+>]<,i>检测方法之一。 本文首先介绍了各种检测[Ca<'2+>]<,i>的方法与技术，列举了比率荧光检测系统的优点以及需要改善的地方，并就此提出了本文的研究目的与意义。 在本论文中，主要做了以下工作： 1、对待测细胞Hepal-6(小鼠肝癌细胞)的荧光探针(Fura-2/AM)的标记时间和标记浓度进行了参数筛选。通过实验，比较不同的标记效果，发现5/μmol/L的标记浓度和30min的标记时间为实验系统中Fura=2/AM的最佳标记参数。 2、对计算公式[Ca<'2+>]=β·K<,d>·(R-R<,min>)/(R<,max>-R)中的两个定标参数R<,max>与R<,min>进行了体内校正，并对可能影响到这两个参数的因素做了相应分析，使测定过程中的定标更加精确，测定结果更加接近生物体的实际水平。最后综合分析了在不同细胞密度和不同标记浓度下测得的R<,max>与R<,min>，确定R<,max>=1.920±0.376，R<,min>=0.480±0.041。 3、应用改善后的实验系统检测并分析了激动剂KCl对非兴奋细胞的[Ca<'2+>]<,i>的影响。发现10mmol/L KCl即可引起Hepal-6细胞的[Ca<'2+>]<,i>上升；当KCl浓度上升至30mmol/L和50mmol/L时，所引发的[Ca<'2+>]<,i>变化同10mmol/L KCl的作用没有显著差异。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:主要符号说明

声明

第一章引言

1.1有关[Ca2+]i

1.2常用[Ca2+]i的检测方法与技术

1.3比率荧光系统

1.3.1装置及主要检测原理

1.3.2检测[Ca2+]i的理想条件分析与探针选择

1.4本文的研究目的与意义

第二章比率荧光系统检测[Ca2+]i的影响因素分析

2.1Fura-2简介[33]及其温孵参数

2.1.1浓度与时间参数筛选

2.1.2结果与讨论

2.2体内校正Rmax与Rmin

2.2.1系统校正

2.2.2体内校正实验

2.2.3结果与讨论

2.3本章总结

第三章激动剂氯化钾(KCl)对[Ca2+]i影响的检测

3.1实验

3.2结果与讨论

3.3本章总结

第四章总结与展望

参考文献：

硕士期间发表的论文

致谢