女贞子中裂环环烯醚萜苷类成分的研究

摘要

女贞子为木犀科(Oleaceae)植物女贞(Ligustrum lucidum Ait．)的干燥成熟果实，始载于《神农本草经》，列为上品，是我国传统的扶正固本中药。味甘、苦，性凉，具有滋补肝肾，明目乌发的功效。临床主要用于治疗眩晕耳鸣，腰膝酸软，目暗不明，须发早白等症。 文献研究表明女贞子中主要含有脂溶性极强的三萜类成分，以齐墩果酸为其代表。长期以来，国内外对于齐墩果酸，从化学到药理都进行了深入系统的研究，并建立了多种定量分析方法。然而女贞子按照祖国医学中药的传统用药方法，是作为水煎液服用，因而其中的水溶性活性成份不容忽视。 20世纪90年代后的国内外研究表明，女贞子中除低极性的齐墩果酸外，还有含量较高的环烯醚萜苷类水溶性成分。环烯醚萜苷具有保肝利胆、抗肝纤维化、抗菌消炎、抗肿瘤、降血脂、降血糖、降低血液粘度、增强机体免疫调节等多种药理活性，能够反映女贞子药材的药理作用，日益引起广泛重视。 本文以女贞子药材作为研究对象，采取溶剂萃取法、硅胶柱层析，特别是制备高效液相色谱分离方法，从中分离到5种化合物，并运用波谱(UV、IR、<'13>CNMR、<'1>HNMR)手段，结合理化常数，鉴定了它们的结构，分别是齐墩果酸、熊果酸、女贞苷、女贞苷G13及D-葡萄糖，其中2种是裂环环烯醚萜苷类成分(女贞苷及女贞苷G13)。 为了更进一步研究女贞子中的裂环环烯醚萜苷类成分，本文采取HPLC法，双波长检测、梯度洗脱，同时考察了全国不同产地、不同采集时间女贞子样品中女贞苷及女贞苷G13两种成分的含量。结果表明，分离到的女贞苷和女贞苷G13系女贞子中水溶性裂环环烯醚萜苷类化合物的两种主要成分；不同地区女贞子药材中上述两种成分的含量差别较大，最高分别可达1.089％和0.478％，最低含量则分别为0.026％和0.013％，可能与不同品种来源及加工炮制方法等因素有关；并且发现，在女贞子果实及女贞叶中，女贞苷和女贞苷G13的含量变化趋势一致，均为先增后减，在11月初至中旬左右达到最大值，这与女贞子药材的传统采收季节一致。 本实验同时研究了女贞苷和女贞苷G13在区带毛细管电泳中的迁移行为，建立了毛细管区带电泳法快速分离分析以上两种成分的方法。通过各种条件的优化，发现背景缓冲液的pH值、硼砂浓度、分离电压对分离均具有重要意义：pH值极大的影响着各物质在毛细管中的迁移行为；高浓度缓冲液可以获得较好的分离度，但保留时间变长，而且导致通过毛细管的电流增加，从而增大焦耳热，严重影响峰形：分离电压是毛细管电泳的一项重要参数，实验证明，增加组分的迁移速度是减少谱带展宽、提高分辨效率的重要途径，但高电场强度也会导致毛细管的电流增加而增大焦耳热。论文中并且对女贞苷和女贞苷G13的抗氧化活性和抗菌活性进行了初步研究。通过抗氧化活性实验中的数据比较，发现2种成分均有显著的抗氧化活性，剂量效应之间呈正相关，其中女贞苷G13清除DPPH自由基的作用强于女贞苷，而由于两者的结构差异仅在于女贞苷G13比女贞苷多了一个裂环环烯醚苷结构，由此说明糖苷类结构对清除自由基具有积极作用，这对于深入研究女贞子的抗氧化机理具有十分重要的意义。 因此，本文以女贞子药材中提取分离得到女贞苷及女贞苷G13作为女贞子药材中有代表性的水溶性指标成分，测定其含量，为2010版中国药典女贞子含量测定项的修订开展了铺垫工作。

目录

文摘

英文文摘

声明

一研究概况

1女贞子的植物学与本草研究

1.1女贞子的品种来源与考证

1.2原植物形态及分布

1.3加工与炮制

1.4鉴别研究

2女贞子的化学成分研究现状

2.1三萜类

2.2裂环环烯醚萜类

2.3黄酮类

2.4甾醇类

2.5苯乙醇类

2.6糖类

2.7其他类成分

3女贞子的药理作用研究

3.1与功效相关的药理作用

3.2其他药理作用

3.3毒理研究

3.4临床研究

4女贞子化学成分的含量测定方法研究

5女贞子开发研究现状

6小节

二女贞子化学成分的提取分离与鉴定

1实验材料和仪器

1.1材料

1.2试药与试剂

1.3仪器

2女贞子薄层色谱法的建立

2.1硅胶G薄层板的制备

2.2展开剂的选择

2.3显色剂的选择

3酸碱稳定性试验

4提取与分离

4.1提取条件的选择

4.2提取

4.3经典柱层析法分离

4.4提取分离流程图

4.5制备高效液相法分离制备化何物C和D

5五种化合物的结构鉴定与波谱解析

5.1理化常数和波谱测定

5.2测定结果

6讨论

三女贞子中裂环环烯醚萜苷类成分的分析

(一)高效液相法测定中药女贞子中两种裂环环烯醚萜苷类成分的含量

1仪器和试药

2方法与结果

3讨论

(二)毛细管电泳法分离分析中药女贞子中两种裂环环烯醚萜苷类成分

1仪器和试药

2方法与结果

3讨论

(三)中药女贞子中两种裂环环烯醚萜苷成分抗氧化活性的初步研究

1仪器和试药

2方法与结果

3讨论

(四)中药女贞子中两种裂环环烯醚萜苷成分抗菌活性的初步实验

四结语(关于做好现行中药质量标准的修订工作)

参考文献

附图

致谢