大白猪和五指山猪小肠钠依赖型磷转运吸收的比较研究

摘要

钠依赖型磷主动吸收是动物小肠磷吸收的重要方式，深入了解生长猪小肠钠依赖型磷主动吸收的生物学特性，对科学供给生长猪日粮磷水平，提高日粮磷利用率和减少磷污染具有重要意义.然而目前国内外针对生长猪的磷主动转运特性的报道尚不多见.为更好地揭示生长猪无机磷转运的特性，并为今后在分子水平对高效吸收无机磷的猪种进行选择，本研究选用体型和骨骼发育差异较大的人工选育的大白猪和野生五指山猪作为研究对象.通过检测不同条件下小肠上皮细胞刷状缘膜囊泡(brush-border membrane vesicles，BBMV)与放射性<'32>P的结合情况，确定生长猪小肠BBMV钠依赖型无机磷转运对pH和钠离子的依赖性，并比较两种猪钠依赖型磷摄入的动力学参数的差异.另外，运用荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹技术分别测定和比较两种猪小肠钠依赖型磷转运蛋白(NaPi-IIb) mRNA及其蛋白在小肠各段的表达量，研究小肠中NaPi-IIb的分布情况，从而确定生长猪对无机磷吸收的主要部位. 研究结果表明，生长猪BBMV对磷的主动吸收在酸性pH下受到抑制.钠离子水平影响BBMV磷的主动吸收，pH7.4条件下，转运1个磷酸根，至少需要2个钠离子与其协同转运.pH7.4条件下，五指山猪空肠磷转运系统对磷的亲和力较大白猪高，而且最大转运速度(Vmax)也比后者略高，但是差异均不显著.在五指山猪十二指肠未检测到NaPi-IIb蛋白.根据不同肠道NaPi-IIb基因的mRNA水平和蛋白表达水平，本研究首次表明，NaPi-IIb磷转运系统主要存在于猪回肠中，而在十二指肠中NaPi-IIb介导的磷吸收较少.

目录

文摘

英文文摘

独创性声明及关于论文使用授权的说明、《学位论文出版授权书》

第一章引言

1.1课题的来源和意义

1.2课题的主要研究内容

第二章文献综述

2.1无机磷吸收方式及其认识历程

2.2磷转运蛋白的类型

2.3 NaPi-Ⅱ蛋白分子的生物学特性

2.4动物肠道Na-Pi主动吸收的特点

2.5总结

第三章材料与方法

3.1主要试剂和仪器

3.2实验动物与饲养管理

3.3样品采集

3.4 BBMV的制备和纯化

3.5 BBMV的鉴定

3.6 BBMV对于磷转运吸收的测定

3.7小肠黏膜总RNA的提取

3.8 cDNA第一链的合成

3.9荧光定量PCR(Real-time PCR)

3.10 Western杂交

3.11数据处理与统计分析

第四章实验结果

4.1 BBMV的制备及纯度检测

4.2 BBMV对于磷转运吸收特性的测定

4.3不同肠段NaPi-Ⅱb基因表达水平的检测

4.4不同肠段NaPi-Ⅱb转运蛋白表达水平的研究

第五章讨论

5.1 BBMV的提取

5.2肠道钠依赖型磷转运系统对pH和钠离子的依赖性

5.3五指山猪与大白猪的磷转运吸收的比较

5.3小肠NaPi-Ⅱb蛋白的糖基化

结论

论文存在问题及下一步研究展望

参考文献

缩写表

致谢

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