葛根提取工艺优化及血清药物化学初步研究

摘要

葛根是我国的常用中药材，根据2000年版《中国药典》，野葛和粉葛的根都用作葛根。然而，这两种物种在2005年版中国药典中被区分开来。粉葛为豆科植物甘葛藤Pueraria thomsonii Benth.的干燥根，葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的干燥根。它们在治疗心血管疾病、高血压和糖尿病方面具有显著的药理活性，是药食同源两用植物。 两种葛根在粉碎后，几乎分辨不出，但两种葛根的疗效并不完全相同。本课题拟采用液质联用技术和血清代谢组学理论，研究野葛和粉葛的成分及其体内代谢途径的差异，为外形相似、易混淆中药的鉴别提供一种新的分析方法和手段。 （1）提取工艺及体外抗氧化研究 采用乙醇回流法、超声辅助回流提取法两种方法对葛根总黄酮提取工艺进行考察，选取葛根总黄酮得率、干浸膏得率为考察指标，综合单因素和正交试验结果，确定野葛的最佳提取工艺为：40%乙醇、料液比1:20、80℃恒温水浴提取2h。粉葛中总黄酮的最佳提取工艺为：50%乙醇、料液比为1：10、75℃超声65min。 采用紫外分光光度法，对野葛和粉葛的DPPH清除能力、总还原能力和羟基自由基清除能力进行了测定，发现两者都表现出一定的抗氧化活性，并且野葛的体外抗氧化活性要高于粉葛，可能与其总黄酮含量高于粉葛有关。 （2）体外物质基础研究 本实验采用液相和色谱联用技术从野葛中可以检测出葛根素、3’-羟基葛根素、3’-甲氧基葛根素等24种化合物，从粉葛中鉴定出葛根素、大豆苷、葛根素木糖苷、鸢尾黄酮苷等16种化合物。3'-羟基葛根素和3'-甲氧基葛根素是两者的差异性物质，可能是化学标记，用于区分两种葛根物种。 （3）血清代谢组学研究 本实验采用大鼠作为入血动物模型，利用LC-MS技术对采集的野葛和粉葛的血清进行分析，通过代谢组学研究方法，对两种葛根的内源性代谢物和外源性物质进行筛选，选择VIP>1，P<0.05的数据，通过数据库进行比对确定潜在的生物标志物，结果显示主要是甘油磷脂和甘油磷脂胆碱类化合物。发现野葛中潜在生物标记物有62种，并发现一个原型化合物葛根苷B，它在血中的代谢通路有甘油脂代谢、鞘脂代谢和糖基磷脂酰肌醇（GPI）-锚生物合成。而分析粉葛血清，发现潜在生物标记物79种，还有一个原型化合物大豆皂醇A，它在血液中的代谢途径有鞘脂代谢、甘油磷脂代谢、糖酵解或糖异生、肌醇磷酸代谢和嘌呤代谢。

目录

1绪论

1.1葛根

1.2代谢组学

1.3中药血清药物化学

1.4立题依据及目的

2葛根总黄酮提取工艺及抗氧化活性

2.1实验材料

2.2实验方法

2.3结果与讨论

2.4本章小结

3基于 UPLC-MS/MS鉴定葛根体外物质基础

3.1实验材料

3.2实验方法

3.3结果

3.4讨论

3.5本章小结

4基于 UPLC-MS/MS比较野葛/粉葛入血成分的差异

4.1实验材料

4.2实验方法

4.3结果

4.4讨论

4.5本章小结

5总结

5.1结论

5.2创新点

5.3展望

致谢

参考文献

附录 A：葛根中化合物数据库

攻读学位期间的学术成果

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