HFRS患者血清中汉坦病毒RNA的微孔板杂交检测

摘要

研究的内容和结果如下:1.总RNA的提取应用Sigma公司试剂,全部过程仅需70分钟,且均在一个Eppendorf管中操作,并直接在原管中进行反转录,可以最大限度地利用所提取的RNA,并可减少污染.2.建立RT-nested PCR方法,对98例HFRS患者血清(经临床和IFA确诊)进行检测,阳性率分别为71.8﹪(≤7天)、62.8﹪(8-14天)、33.3﹪(15-21天)和0(≥22天),总阳性率为59.2﹪3.对PCR产物进行限制性酶切分型,结果48例患者中,PCR产物酶切分型47例为Ⅰ型,仅有1例为Ⅱ型.说明西安地区HFRS的病原以HTNV为主,这与流行病学调查报道(Ⅰ型占99.13﹪)相符.4.利用双标记内引物进行RT-PCR扩增后,对产物进行酶免疫检测,阳性率分别为:85.7﹪(≤7天)、79.1﹪(8-14天)、78.6﹪(15-21天)和65.7﹪(≥22天),总阳性率达80.6﹪.PCR产物行琼脂糖电泳阳性者,酶免检测均阳性,符合率达100﹪.5.对5份正常人、2份非HFRS发热病人和3份乙肝病人血清进行微孔板杂交检测,结果均为阴性.证实该方法对于HFRS的早期实验诊断具有较高的敏感性和特异性,是可替代RT-PCR的较理想的方法.6.对108份临床确诊HFRS患者血清标本进行微孔板杂交分析.结果阳性率分别为:87.2﹪(≤7天)、83.7﹪(8-14天)、73.7﹪(15-21天)和57.1﹪(≥22天),总阳性率达81.5﹪,琼脂糖电泳阳性者,微孔板杂交均阳性,符合率达100﹪,证明微孔板杂交法检测患者血清中HV RNA的敏感性和特异性高于常规RT-PCR方法,可以用于HPRS患者的早期实验诊断.

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小结

参考文献

致谢