逆转录病毒pLXSN-BDNF转基因成肌细胞在面神经损伤治疗中的初步应用研究

摘要

面神经和表情肌的损伤和再生是颌面外科中一个重要的研究领域.面神经损伤后,肌肉将发生失神经萎缩,如果在一定时间内,这些肌肉得不到神经的再支配,它们将发生永久性变性,造成永久性面瘫.再生神经失去靶肌是修复治疗永久性面瘫疗效不佳的根本原因之一.合理的治疗的方法是进行神经肌肉的联合移植.但是,这种手术难度大,风险高,疗效有限,同时可能遗留供区的功能障碍.因此,寻找一种新的治疗技术,既达到延长失神经肌肉的可再生时间,又能为神经再生提供神经营养的微环境,是面瘫研究的前沿课题.该研究是通过分子生物学技术和组织工程技术的结合,在体外构建整合有人BDNF的逆转录病毒载体,感染体外培养的肌卫星细胞,再通过细胞移植技术,达到同期提供肌肉再生的种子细胞和对神经再生有重要作用的神经营养因子目的,也是一种基因治疗面瘫方法的新的尝试.

目录

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缩略语表

前言和文献回顾

文献回顾（一）BDNF和神经损伤与再生

文献回顾二 成肌细胞介导的基因治疗

实验正文

第一部分 卫星细胞的分离和培养

实验一 用肌纤维分离法得到高纯度卫星细胞

实验二 肌纤维分离法和以前各种SCs原代分离方法的比较研究

实验三 不同培养条件对卫星细胞增殖的影响

第一部分小结

第二部分卫星细胞体内移植实验

实验一 肌肉冻伤模型的建立

实验二 卫星细胞在肌肉冻伤模型中的修复作用

第二部分 实验总结

第三部分 pLXSN-hBDNF病毒载体的构建和活性检测

实验一 hBDNF基因序列的获得和测序

实验二 hBDNF-pLXSN病毒载体的构建和测序

实验三 逆转录病毒的包装和滴度检测

实验四 转基因卫星细胞上清中BDNF活性测定

第三部分小结

第四部分逆转录病毒pLXSN-BDNF感染的卫星细胞在面神经损伤中对神经元细胞的保护作用

全文总结

参考文献

附录

简历和论文发表

致 谢