复合骨髓间充质干细胞的组织工程皮肤修复皮肤缺损

摘要

本研究应用组织工程学原理，在前人研究的基础上，体外扩增自体来源的间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)，构建复合MSCs的组织工程学(Tissueengineering，TE)皮肤修复猪皮肤缺损，临床观察修复难愈性皮肤溃疡的效果。为寻找理想的TE皮肤种子细胞和临床治疗类似疾病提供新思路。主要研究工作分为三个部分： 1.骨髓间充质干细胞的体外培养。 研究目的：探讨体外培养MSCs的方法和MSCs的一些生物学特性，为TE皮肤提供新的种子细胞。 研究方法：采用Percoll分离液行密度梯度离心法分离猪的MSCs细胞，体外扩增培养。 研究结果：多次传代后的MSCs为形态更均一、排列更有序的成纤维细胞样，提示传代过程对纯化骨髓单个核细胞中的MSCs组分有一定作用。 研究结论：猪MSCs在体外条件下生长稳定，传代后仍保持未分化状态，有分化的潜能，可作为TE皮肤的种子细胞。 2.复合MSCs的组织工程皮肤修复猪皮肤缺损的实验研究。 研究目的：探讨复合MSCs的TE皮肤对提高皮肤创面修复质量的作用，为临床皮肤损伤后修复提供新的治疗方法。 研究方法：体外培养并纯化扩增猪自体MSCs，构建复合MSCs(PKH26标记)的组织工程皮肤，移植于全厚皮肤缺损创面，观察创面愈合情况。 研究结果：移植的皮肤全部存活，10周时其组织学表现接近正常皮肤。 研究结论：在愈合过程中MSCs参与了皮肤重建，有加快创面愈合速度和提高愈合质量的作用。 3.复合MSCs的组织工程皮肤修复皮肤难愈性溃疡的探讨。 研究目的：探讨复合MSCs的组织工程皮肤修复皮肤缺损中的疗效，为临床治疗类似疾病提供新方法。 研究方法：利用组织工程学方法，以牛胶原为支架，以患者MSCs为种子细胞，构建组织工程皮肤。对1例双下肢溃疡15年的患者进行移植，观察治疗效果。 研究结果：移植后1周溃疡边缘变平，健康的肉芽组织形成，2周后皮岛扩大，边缘形成了较薄的上皮组织。4周后溃疡面积缩小40％，9周后溃疡面积缩小90％。 研究结论：构建的复合有MSCs的组织工程皮肤移植后，提高了愈合速度，获得了较理想的创面愈合效果。为临床治疗类似溃疡型疾病提供了新的治疗思路。

目录

独创性声明及保护知识产权声明

缩略语表

前 言

文献回顾

实验一骨髓间充质干细胞的分离培养

实验二复合骨髓间充质干细胞的组织工程皮肤修复猪皮肤缺损的实验研究

实验三复合骨髓间充质干细胞的组织工程皮肤治疗难愈性溃疡的探讨

小 结

参考文献

附图

个人简历

致 谢