过氧化氢对晶状体上皮细胞增生及VEGF表达的影响

摘要

目的:白内障是世界主要致盲性疾病之一。研究认为紫外线和可见光能诱发晶状体产生氧自由基，是导致老年性白内障的主要因素之一。多数白内障患者前房内过氧化氢（H2O2）含量升高。H2O2可刺激晶状体上皮细胞分泌一些生长因子如结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）、晶状体上皮源性生长因子（lens epithelial derived growth factor,LEDGF），引起细胞生物学效应的改变。但其对晶状体上皮细胞分泌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)有无影响却未见相关研究。研究显示H2O2可刺激多种细胞分泌VEGF，从而发挥一定的生物学效应。因此，本实验的研究目的：
　　（1）观察不同浓度的H2O2对晶状体上皮细胞增生的影响；
　　（2）研究不同浓度H2O2对晶状体上皮细胞分泌VEGF的影响，及VEGF的分泌变化与晶状体上皮细胞在H2O2作用下的增生效应变化之间的关系。
　　方法：
　　(1)分组及处理：实验共分8组。体外培养的人晶状体上皮细胞系SRA01/04，在培养液中分别加入浓度为1nM,10nM,100nM,1μM,10μM,100μM和1mM的过氢并处理40min，对照组无过氧化氢，随后换至正常培养液中继续培养，分别于不同时间点观察各项指标的变化；
　　(2)不同浓度的过氧化氢对人晶状体上皮细胞增生的影响:按照上述方法处理后，分别于在0、6、12和24h用MTT方法检测晶状体上皮细胞的增生活力,在6h用Western blot观察不同浓度过氧化氢对晶状体上皮细胞表达PCNA的影响；
　　(3)不同浓度的过氧化氢对人晶状体上皮细胞表达VEGF的影响:按照上述方法处理后，于24h用ELISA方法检测培养液上清中血管内皮生长因子（VEGF）的含量。
　　结果：
　　(1)不同浓度的过氧化氢对人晶状体上皮细胞增生的影响：MTT结果提示：在培养液中加入1nM～10μM浓度的H2O2处理组，晶状体上皮细胞增生率（OD值）随浓度较对照组明显增加，其中以10nM最为明显；而100μM、1mMH2O2处理组，晶状体上皮细胞出现生长抑制。用Western blot检测PCNA表达的结果显示：1nM～10μMH2O2处理组，晶状体上皮细胞PCNA表达随浓度较对照组明显增加，其中以10nM最为明显；而100μM、1mMH2O2处理组晶状体上皮细胞内PCNA表达明显降低；
　　(2)不同浓度的过氧化氢对人晶状体上皮细胞表达VEGF影响：1ｎM-10μM的过氧化氢刺激后，VEGF水平均高于对照组，且呈浓度依赖性，峰值出现在10ｎM和10μMH2O2处理组。反之，100μM、1mM处理组，VEGF水平与对照组无显著差异，而且明显低于10nM组（P<0.05）。
　　结论：
　　(1)低浓度（1nM～10μM）的H2O2可以促进晶状体上皮细胞增殖，高浓度的过氧化氢（100μM、1mM）对细胞具有杀伤作用；
　　(2)低浓度（1nM～10μM）的H2O2可使VEGF分泌增加，且与刺激晶状体上皮细胞增殖的浓度一致，提示VEGF可能作为一种氧化应激产物引起晶状体上皮细胞的增生效应。
　　创新点：
　　首次观察了过氧化氢对晶状体上皮细胞分泌VEGF的影响。

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文献回顾

0 前言

1 氧化应激与白内障的发生、发展

2 晶体上皮细胞与白内障的发生、发展

4 氧化应激对晶状体上皮细胞表达VEGF的影响

正文

实验一 不同浓度的血清对晶状体上皮细胞增生的影响

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

实验二 不同浓度过氧化氢对晶状体上皮细胞增生的影响

1 材料

2 方法

3 结果

4.讨论

实验三 不同浓度的过氧化氢对晶状体上皮细胞分泌 VEGF 的影响

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

附录

个人简历和研究成果

致谢