神经保护策略治疗病理性疼痛的基础研究

摘要

神经病理性痛是一种常见的临床顽症，它所引起的生理、心理和社会问题已严重阻碍了现代人群生活质量的提高，业已成为医学和生物学中最富挑战的问题之一。迄今为止，治疗神经病理性痛的药物和手段多为简单对症，又或针对单一机制，效果不佳且副作用大。因此，深入探讨机制和开发新型针对多靶点的治疗药物/方法十分必要。
　　神经损伤（外伤、炎症等）是神经病理性痛最主要的原因。研究证明，高压氧具有较强的神经保护作用，可减轻或消退神经组织水肿、改善组织供氧、促进周围神经再生、抑制炎症反应。我们实验室在国际上首先证实高压氧预处理能够诱导脊髓缺血耐受。此外，中药在我国具有悠久的历史，由于其良好的生理效应及毒副作用少等优点，广泛应用于临床。我们前期研究发现中药（参扶、川芎嗪等）亦可减轻脑、脊髓缺血再灌注损伤，发挥神经保护作用。那么，高压氧和中药能不能早期治疗损伤，晚期重建“平衡”，抑制神经病理性痛的产生，缓解维持期神经病理性痛呢？本研究拟采用坐骨神经慢性缩窄性损伤模型（CCImodel），运用神经行为学等研究方法，探讨高压氧和参扶注射液对神经病理性痛的影响，初步探讨其可能的机制，旨在开发有效、无创、多靶点、副作用小的全新的治疗神经病理性痛的临床手段。
　　第一部分：高压氧对神经病理性痛的影响及其机制初探
　　实验一早期高压氧治疗对CCI大鼠神经病理性痛发生的影响及其机制初探
　　目的：观察早期高压氧治疗对坐骨神经慢性缩窄性损伤（CCI）大鼠神经病理性痛发生的影响，并初步探讨其可能机制。方法：SD大鼠84只，随机分为7组(n=12)：①假手术组（sham组）；②对照组（CCI组），即单纯行CCI手术组；③高压空气组（HBA组），本组动物于CCI术后4小时即行3.0ATA、21％O2高压空气治疗，连续7d，1次/d；④纯氧组（O2组），本组动物于CCI术后4小时即行1.0ATA、100％O2治疗，其余参数同高压空气组；⑤高压氧A组（HBOA组），本组动物于CCI术后4小时即行1.5ATA、100％O2高压氧治疗，连续7d，1次/d；⑥高压氧B组（HBOB组），本组动物于CCI术后4小时即行2.0ATA高压氧治疗，其余参数同高压氧A组；⑦高压氧C组（HBOC组），本组动物于CCI术后4小时即行3.0ATA高压氧治疗，其余参数同高压氧A组。术前2d和术后第3，7，10，14d，其后每隔7d分别测定各组大鼠热缩足反射潜伏期(TWL)、机械缩足反射阈值(MWT)。结果：（1）CCI组、sham组、HBOC组各组间MWT，TWL比较均存在显著差异（RMANOVAbyposthocLSD，P＜0.01）。与sham组比较，CCI组术后各时间点的MWT显著降低，TWL明显缩短（One-wayANOVA，P＜0.01）。（2）HBOC组大鼠术侧后肢术后MWT各时间点数值较sham组明显降低，但均显著高于CCI组（RMANOVAbyposthocLSD，P＜0.01）。HBOC组大鼠术侧后肢的TWL在术后各时间点也都显著高于CCI组（RMANOVAbyposthocLSD，P＜0.01），与sham组相较，HBOC组大鼠的TWL在第3，7，10，14日明显缩短（One-wayANOVA，P＜0.01），但自第21日起则恢复至正常。（3）HBOC组与HBA组、O2组各组间MWT，TWL比较均存在显著差异（RMANOVAbyposthocLSD，P＜0.01）。HBOC组大鼠术侧后肢术后MWT，TWL各时间点数值均显著高于HBA组和O2组（One-wayANOVA，P＜0.01）。（4）HBOC组与HBOA组、HBOB组各组间MWT，TWL比较均存在显著差异（RMANOVAbyposthocLSD，P＜0.01）。HBOC组大鼠术侧后肢术后MWT，TWL各时间点数值均显著高于HBOA组和HBOB组（One-wayANOVA，P＜0.01）。结论：早期高压氧治疗能有效抑制CCI大鼠热、机械性痛敏的发生，3ATA高压氧的镇痛效果优于1.5、2.0ATA，其镇痛作用是高压、高氧因素共同作用的结果。
　　实验二：晚期高压氧治疗对CCI大鼠维持期神经病理性痛的影响
　　目的：观察晚期高压氧治疗对CCI大鼠维持期神经病理性痛的影响。方法：SD大鼠28只，测定TWL、MWT基础阈值后，行CCI术。筛选机械性异常痛觉和热痛敏表现明显的CCI大鼠（排除神经病理性痛不明显的大鼠9只），再将之随机分为两组：①对照组（CCI组，n=9），即单纯行CCI手术组；③高压氧治疗组（HBOT组，n=10)，本组动物于CCI术后第14日行3.0ATA、100％O2高压氧治疗，连续3d，1次/d。各组大鼠均于术前2d和术后第7,14，17,21,24,28日分别测定各组大鼠热缩足反射潜伏期(TWL)、机械缩足反射阈值(MWT)。结果：HBOT组与CCI组相比，MWT和TWL之间均存在显著差异（RMANOVAbyposthocLSD，P＜0.01）。与CCI组相比，HBOT组术后大鼠术侧后肢的MWT在第17，21，24日显著增高，TWL在第17，21，24日明显延长（One-wayANOVA，P＜0.01）。结论：晚期高压氧治疗可显著缓解CCI大鼠维持期的热、机械性痛敏，且高压氧治疗结束后，其有效时间可维持7d左右。
　　实验三：高压氧预处理对CCI大鼠神经病理性痛的影响
　　目的观察高压氧预处理对CCI大鼠神经病理性痛的影响。方法SD大鼠24只，随机分为3组(n=8)：①假手术组（sham组），除不结扎神经外，其余操作同HBOp组；②对照组（CCI组），即单纯行CCI手术组；③高压氧预处理组（HBOp组），本组动物于CCI术前行3.0ATA、100％O2高压氧治疗，连续7d，1次/d，末次高压氧处理后24小时行CCI手术。各组大鼠均于术前8，1d和术后第3，7，10，14日以热辐射法测定大鼠热缩足反射潜伏期(TWL)以评价大鼠热痛觉过敏。结果HBOp组与CCI组、sham组之间的TWL比较均存在显著差异（RMANOVAbyposthocLSD，P＜0.01）,HBOp组的TWL虽明显低于sham组，但在术后第3，7日却显著高于CCI组。结论高压氧预处理能有效延迟CCI大鼠热痛敏的发生。
　　第二部分参芪扶正注射液对CCI大鼠神经病理性疼痛的影响
　　目的：探讨早期给予参芪扶正注射液能否抑制CCI大鼠神经病理性疼痛的发生。方法：SD大鼠32只，随机分为4组(n=8)：①假手术组（sham组）；②对照组（CCI组），即单纯行CCI手术组；③CCI+生理盐水组（CCI＋saline组），本组动物于CCI术后立即腹腔注射生理盐水25ML/kg，连续7d，1次/d；④CCI+参附组（CCI+ShenFu组），本组动物于CCI术后即刻腹腔注射参芪扶正注射液，剂量25ML/kg，连续7d，1次/d。于术前2d，术后1,3,7,10,14d分别测定各组大鼠热缩足反射潜伏期(TWL)、机械缩足反射阈值(MWT)。结果：与Sham组比较，CCI组和CCI+Saline组术后各天TWL，MWT明显降低(P＜0．01)，其MWT从术后第1日即开始下降，第7日降至最低值(为基础值的19.7％和18.1％，与基础值比较均P＜0.01)；其TWL从术后第1日即开始缩短，第3日即缩短至最低值(为基础值的58.4％和60.2％，与基础值比较均P＜0.01)，CCI组和CCI+Saline组两组间差异无统计学意义。与CCI，CCI＋Saline组相比，CCI+ShenFu组在术后第1，3，7日的MWT值明显提高（P＜0.01），术后第1日TWL值明显增加（P＜0.01）。结论：早期给予参芪扶正注射液可以轻度延缓CCI大鼠机械性痛敏的形成，抑制术后第1日的热痛敏。19.7％和18.1％，与基础值比较均P＜0.01)；其TWL从术后第1日即开始缩短，第3日即缩短至最低值(为基础值的58.4％和60.2％，与基础值比较均P＜0.01)，CCI组和CCI+Saline组两组间差异无统计学意义。与CCI，CCI＋Saline组相比，CCI+ShenFu组在术后第1，3，7日的MWT值明显提高（P＜0.01），术后第1日TWL值明显增加（P＜0.01）。
　　小结
　　1.早期高压氧治疗能有效抑制CCI大鼠热、机械性痛敏的发生；3ATA高压氧的镇痛效果优于1.5ATA和2.0ATA；早期高压氧治疗的镇痛作用是高压、高氧因素共同作用的结果。
　　2.晚期高压氧治疗可显著缓解CCI大鼠维持期的热、机械性痛敏，且高压氧治疗结束后，其有效时间可维持7d左右。
　　3.高压氧预处理能有效延迟CCI大鼠热痛敏的发生。
　　4.早期给予参芪扶正注射液可以轻度延缓CCI大鼠热、机械性痛敏的发生。

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缩略语表

中文摘要

英文摘要

前言

文 献 回 顾

1 神经病理性痛概述

2 高压氧、中药的神经保护作用

3 高压氧、中药治疗神经病理性痛的研究现状

4 归纳总结，提出假说

实验仪器和试剂

正文

第一部分 高压氧对神经病理性痛的影响及其机制初探

实验一 早期高压氧治疗对 CCI 大鼠神经病理性痛发生的影响及其机制初探

1 实验动物及分组

2 材料与方法

3 结果

实验二 晚期高压氧治疗对 CCI 大鼠维持期神经病理性痛的影响

1 实验动物及分组

2 材料与方法

3 结果

实验三 高压氧预处理对 CCI 大鼠神经病理性痛的影响

1 实验动物及分组；

2 材料与方法

3 结果

第二部分 参芪扶正注射液对 CCI 大鼠神经病理性疼痛的影响

0 引言

1 实验动物及分组

2 材料与方法

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

附录

个人简历和研究成果

致谢