脱氧雪腐镰刀菌烯醇对小鼠免疫功能的影响

摘要

试验一脱氧雪腐镰刀菌烯醇对小鼠免疫功能的影响 本试验旨在研究小鼠摄入不同水平的DON对小鼠免疫功能的影响。将48只SPF昆明小鼠随机分为4组，每组12只，雌雄各半。第1组为对照组，饲喂基础日粮，第2-4组为试验组，在基础日粮中分别添加2、4、8 mg/kg DON，饲喂20 d。结果显示，日粮添加2-8 mg/kg DON，雄鼠增重显著低于对照组(P＜0.05)，日粮添加8 mg/kg DON，雌鼠增重显著降低（P＜0.05）。日粮中添加4 mg/kg DON，雄鼠胸腺和脾脏指数显著高于其他各组(P＜0.05)，添加8 mg/kg DON雄鼠胸腺和脾脏指数显著低于对照组（P＜0.05）。日粮添加2-8 mg/kg DON，雄鼠血液白细胞数、血浆中IgA、IgM和IgG的含量显著低于对照组（P＜0.05）。日粮中加入2-8mg/kg DON，雌鼠血浆中IgA含量显著低于对照组(P＜0.05)。日粮中加入8mg/kg DON，雌鼠血浆中IgM和IgG含量显著低于对照组(P＜0.05)。日粮中添加2 mg/kg和4 mg/kg DON，雄鼠血浆IL-4、IL-6、和TNF-β含量显著高于对照组（P＜0.05），添加8 mg/kg DON，雄鼠血浆中IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ和TNF-β含量显著低于对照组(P＜0.05)。日粮中添加8 mg/kg DON，雄鼠的胸腺淋巴细胞转化率和脾脏淋巴细胞转化率显著低于对照组(P＜0.05)，其余各组差异不显著（P＞0.05）。各组雌鼠血液IL-2、IL-4、IL-6含量、胸腺指数、脾脏指数、血液白细胞数、胸腺淋巴细胞转化率和脾脏淋巴细胞转化率差异不显著（P＞0.05）。由此可见，DON对小鼠有明显的免疫毒性，雄鼠对DON敏感性高于雌鼠。 试验二脱氧雪腐镰刀菌烯醇对体外培养的小鼠胸腺细胞的影响 采用MTT法、细胞因子EILSA法分析DON对体外培养的小鼠胸腺T细胞的淋巴细胞转化率及细胞因子分泌的影响。试验共分5组:①0μg/mL DON+10μg/mL ConA+胸腺淋巴细胞组（ConA组），②2μg/mL DON+10μg/mL ConA+胸腺淋巴细胞组(2μg/mL DON+ConA组)，③4μg/mL DON+10μg/mL ConA+胸腺淋巴细胞组（4μg/mLDON+ConA组），④8μg/mL DON+10μg/mL ConA+胸腺淋巴细胞组（8μg/mL DON+ ConA组），⑤细胞对照组（只含胸腺淋巴细胞，无ConA）。结果表明，2、4、8μg/mLDON对ConA活化的胸腺T细胞的淋巴细胞转化率均有明显的抑制作用（P＜0.05），且表现出剂量依赖性;低浓度DON(2μg/mL)能显著促进胸腺淋巴细胞分泌IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、 TNF-β，而高浓度DON(4、8μg/mL)均显著抑制胸腺淋巴细胞分泌IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-β(P＜0.05)。由此可见，DON能抑制胸腺细胞的淋巴细胞转化率及细胞因子的分泌。 试验三脱氧雪腐镰刀菌烯醇对小鼠胸腺细胞凋亡的影响 本试验旨在研究DON对小鼠胸腺细胞凋亡的影响。将20只SPF昆明小鼠随机分为2组，每组10只，雌雄各半。第1组为对照组，饲喂基础日粮，第2组为试验组，在基础日粮中添加DON8 mg/kg，饲喂20 d。FCM检测结果显示，8 mg/kg DON能显著诱导并促进体内小鼠胸腺细胞的凋亡，平均凋亡率为29.58％（P＜0.05）。DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示，8 mg/kg DON组小鼠胸腺细胞出现凋亡所特有的梯状条带。8 mg/kgDON组小鼠胸腺细胞增殖活性为16.78％，与对照组相比明显降低（P＜0.05）。由此表明，DON能诱导并促进小鼠胸腺细胞的凋亡并抑制其增殖。 试验四脱氧雪腐镰刀菌烯醇对小鼠胸腺细胞MAPK信号通路的影响 本试验旨在研究DON对小鼠胸腺细胞MAPK信号通路的影响。将胸腺细胞接种在24孔细胞培养板中，接种相同的两板。试验分5组，第1组为细胞对照组（不加DON）;第2组为DON组;第3组为ERK激酶抑制剂组:PD98059（40μg/mL）+DON;第4组为p38激酶抑制剂组:SB203580(40μg/mL)+DON;第5组为JNK激酶抑制荆组:SP600125(25μg/mL)+DON（DON终浓度均为8μg/mL）。每组三个重复。结果显示:ERK特异性抑制剂PD98059能显著降低DON诱导的小鼠胸腺细胞的凋亡（P＜0.05），DON作用于小鼠胸腺淋巴细胞ERK的磷酸化水平显著高于对照组（P＜0.05）。表明DON通过ERK MAPK信号通路诱导小鼠胸腺细胞的凋亡。

目录

声明

摘要

前言

第一章 文献综述

第二章 脱氧雪腐镰刀菌烯醇对小鼠免疫功能的影响

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第三章 脱氧雪腐镰刀菌烯醇对体外培养的小鼠胸腺细胞的影响

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第四章 脱氧雪腐镰刀菌烯醇对小鼠胸腺细胞凋亡的影响

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第五章 脱氧雪腐镰刀菌烯醇对小鼠胸腺细胞MAPK信号通路的影响

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

结论

参考文献

中英文对照表

导师组意见

致谢

个人简历

在读期间科研学术成果